процессы или квантовый скачок — CMS Magazine

Два года назад мы серьёзно продумывали организацию наших процессов работы по дизайну. Хотели в 100% случаев с первого раза попадать в ожидания заказчика.

Шаг за шагом мы формально отрисовали весь типичный процесс дизайна (на картинке показан схематично, мы расписали чуть ли не до реплик — кто что обсуждает, как и с кем). И обнаружили в нем «квантовый скачок». Именно тут и происходили сбои. (карта «идеального» процесса есть тут).

Квантовый скачок — это момент между тем, когда все-все-все уже обсуждено, запрототипировано, согласовано, пробрейнштормлено — и тем, когда дизайнер показывает миру свой первый (пусть даже еще и не полностью готовый) макет страницы.

Все, что делается до этого — это попытка прицелиться. Все, что после — попытка компенсировать недолет или перелет.

Казалось бы, наводи точнее: проводи больше исследований, выясняй требования лучше, сделай более въедливый бриф, опроси всех стейкхолдеров, согласовывай концепцию как можно раньше, активнее проводи брейнштормы и применяй креативные методики.

Затем правильно построй процесс презентации и сбора обратной связи — и все будет хорошо.

Я потратил довольно много времени на то, чтобы построить формальный процесс дизайна в своей компании. Сейчас будет целый ПАФОСНЫЙ АБЗАЦ по этому поводу. Мы постоянно совершенствуем его на ретроспективах. Мы систематически применяем брейнштормы и креативные методики. Мы аккуратно собираем образы и строим визуальный бриф. Мы готовим скетчи и прототипы и вовлекаем заказчика на самых ранних этапах. У нас построена многоступенчатая процедура тестирования макетов на живых людях до демонстрации макета заказчику. Мы придумываем фишки и готовы обосновать почти каждый пиксель по дизайну. У нас все лучше и лучше с процессом демонстрации результатов (например, кроме этого процесса у нас появился invision — могу порекомендовать систему). Одна инфографика по этому процессу занимает 5 экранов :).

То, о чем вас просит заказчик, и то, что ему нужно — это разные вещи

Однако shit happens, и порой сразу после демонстрации нам выкатывают такие веселые требования и переделки, при которых от нашей концепции не остается и камня на камне. К счастью, это происходит все реже и реже, но тем сильнее уныние, охватывающее меня, когда мы сделали все по процессу, макет нам самим нравится, соответствует и бизнес-задаче, и брифу, но… Да. Но нет.

Однако теперь я могу с уверенностью сказать, что даже фанатичное следование хорошему процессу не гарантирует попадания в струю на 100%.

Культ карго в IT не работает. А особенно — в дизайне 😉

Я анализировал причины и среди ключевых смог выделить:

• Изменчивость требований. Пока вы рисуете — у заказчика что-то меняется. И вы узнаете об этом последним.

  Попробуйте представить себе белую собаку, рисунок которой вы хотели бы заказать. Насколько четко вам видится этот образ? Как долго вы его можете удержать в голове? Изменился ли образ хоть немножко, пока вы читали этот текст? Вспомните ли вы этот образ точно таким же через час или день, или через неделю? Очевидно, образ поменяется. Поэтому договоренности на словах тут не работают.

  Пожелания к визуальной части дизайна очень изменчивы и чертовски подвержены влиянию увиденного. Влияет все: прочитанные книги, фильмы, сайты, картины… У меня был случай, кода в момент подготовки дизайна заказчик наткнулся на сайт, который ему очень понравился, и по итогам демонстрации нашего макета он начал просить сделать полную копию того, увиденного. Если бы ссылка на этот проект была бы у нас на момент старта работ, пожалуй, мы бы сразу делали несколько другой концепт.

• Неполнота требований. Очевидно, что ни текстом, ни скетчами невозможно отразить полные требования к дизайну. Но это полбеды. На стороне клиента часто есть скрытые агенты влияния, которые оказывают значительное воздействие на его окончательное решение. Директор компании может посоветоваться со своей супругой, знакомым дизайнером или конкурентом. Заранее выявить всех агентов и собрать их мнения воедино — задача нереалистичная.

• Высокая вариативность. Если нужно нарисовать белую собаку — у сотни дизайнеров будет сто разных белых собак с сотней разных оттенков белого. Причем все они будут немного не такими, как это представлял себе менеджер проекта, менеджер заказчика и сам заказчик. Мы на своей стороне принимаем множество конкретных решений, которые невозможно согласовать до получения готового результата (конкретность этих решений подтверждена тем, что конкретные пиксели стоят на конкретных местах 🙂 ). К счастью, в большинстве случаев нам не нужно досконально угадывать образ, который вертится в голове у клиента. Он может там и не вертеться.

Что делать

Изначально задать верное функциональное направлени

е

Правильный процесс сбора требований и анализа бизнес-задачи, применение метода персон — эти методики помогают нам в выборе верного функционального направления в начале работы. Однако все идет насмарку, если вы правильно брифуете не тех людей. Брифуйте самого главного босса — каким бы загруженным он ни был. Босса могут попытаться «спрятать», но прямой контакт с ним — это добро для проекта. Или вы серьезно думаете что, например, сайт Тинькова обошёлся без его личного участия?

Собрать «карту эмоций» проекта

В этом хорошо помогает визуальный бриф. Еще один пласт ожиданий, связанный не с функционалом, а с эмоциями, которые должен вызывать проект у пользователя. И которые вы должны выразить в дизайне.

Вовлечь дизайнера на стадии прототипирования

Обычно функциональный прототип у нас разрабатывает аналитик. Это порождает проблему внутреннего несогласия дизайнера с предложенной структурой. В итоге дизайнер «тупо красит прототип» и получается «тупо отстой». Важно, чтобы дизайнер (как бы это пафосно ни звучало) вложил в дизайн душу. А чтобы он мог это сделать, нужно, чтобы его не воротило от прототипа. Поэтому приходится как можно раньше привлекать его к обсуждению того, что получается, спрашивать его мнения и совместно искать идеи.

Экспериментировать с требованиями. Больше грязных прототипов!

Мокапы, скетчи, прототипы, набросок маркером на доске или карандашом на салфетке — это значительный прорыв по сравнению с 5-ю листами формального ТЗ.

Иногда доказывать на словах, что требования клиента несуразны — сложно и муторно, поскольку не хватает базы аргументов. «Так никто не делает» или «это будет плохо смотреться» или «у нашего дизайнера другое виденье» — не аргументы, а фуфло. Да и бессмысленно что-то доказывать: наша задача — получить правильный продукт.

Один из подходов — сначала сделайте макет именно так, как этого просит заказчик (дословно). Затем сделайте как надо. Сохраняйте промежуточные макеты, чтобы пояснять весь процесс перехода от «как просили» до «как надо». Это почти всегда работает на вас.

Сформируйте в голове клиента понимание дальнейшей работы — расскажите о своих процессах.

Частые демонстрации результата в рамках вашего рабочего процесса позволят на ранних стадиях получить обратную связь и вовремя среагировать на изменения. Кроме того, происходит эмоциональное вовлечение клиента в процесс, он становится причастным к результату.

Тестировать дизайн

Иногда очень полезно сверить дизайн на формальное соответствие требований. Бывает, что-то упускается — намеренно либо нет. Привлекайте ваших QA для формальной проверки дизайна на соответствие функциональным требованиям.

А вот исключить «квантовый скачок» и непрерывные изменения «картинки» в голове заказчика не способны даже самые правильные процессы.

Скажу с уверенностью, что применение нашего систематизированного процесса по дизайну увеличило количество макетов, принимаемых сразу, до 91% (за полгода из 24 макетов всего 2 пришлось фундаментально переделывать). Тем не менее, разработка, полагаясь на одни процессы (из которых создан культ карго) стопроцентной гарантии результата не дает. Нужно иметь «чуйку», умение договариваться и маневрировать по бюджету и срокам… или решимость отказаться от проекта, если найти общий язык с клиентом так и не удалось.

Оригинал: http://blog.sibirix.ru/2013/07/08/cargo-cult-in-webdesign/

DesignWorks: промышленный дизайн; разработка корпусов

© Jocelyn de Noblet, Industrial Design

ДизайнВоркс (DesignWorks) — студия промышленного дизайна.

Наш основной профиль – разработка корпусов электронной техники. Мы выполняем полный цикл работ: от внутренней компоновки прибора до организации контрактной сборки серии. Основные направления наших разработок — техника спецсвязи (радиостанции и телефоны спецсвязи), а также — автомобильная и медицинская техника.

Почему мы справимся с Вашей задачей?

1. Мы давно и успешно занимаемся дизайном и разработкой корпусов, серийность которых — тысячи и десятки тысяч.
2. Мы НЕ делаем дизайн отдельно от других этапов. Наши решения всегда опираются на компоновку изделия, а также — выбранные технологии производства. Поэтому в результате работы вы получите промышленный продукт, а не бесполезные эскизы.
3. Вам нужно разработать герметичный корпус? Мы сделаем это, поскольку чётко знаем, что такое степени защиты оболочки и как их достичь. Нас не пугают коды IP54, IP65, IP68.
4. Нужно защитить печатные платы от считывания информации? Разработать экранированный дисплей? У нас есть опыт таких работ и мы найдём решение.
5. Прибор должен выдерживать падение на бетонный пол? Наши инженеры разработают корпус, устойчивый к ударам.
6. Разрабатываете прибор для автомобиля? Мы справимся, поскольку знаем, каким правилам должна соответствовать техника в современном автомобиле и как этого достичь.
7. Мы разбираемся не только в инженерном деле, но и в медицине, потому способны разработать качественный медицинский прибор.
8. Нам доступны технологические мощности ведущих фабрик КНР и Тайваня. Поэтому мы организуем и контролируем весь цикл работ по изготовлению оснастки. Также сопровождаем и производство деталей. Можем организовать контрактную сборку продукта на базе проверенных партнёров в Азии. Итог наших работ — готовый продукт «под ключ», а не 3D модели или рисунки.

Мы гарантируем высокое качество и уровень разработок. В нашей компании работает команда опытных специалистов, способных сообща решить любую поставленную задачу.

НАШИ ПРОЕКТЫ:

Дизайн сайтов, разработка макета, верстка

Зачем организации нужен свой сайт с уникальным дизайном?

Многие существующие фирмы размещают на созданных сайтах информацию о товарах (их описание, цены, технические характеристики), рекламных акциях, скидках, описание новинок ассортимента. Разработка дизайна сайтов компании позволяет решать сразу несколько задач:

• сообщить целевой аудитории необходимую полезную информацию о стоимости и пр.;
• повысить рейтинг компании за счет обновления контента;
• Грамотная разработка дизайна сайта способна поднять уровень доверия пользователей к бренду, продукту, чтобы они захотели купить товар;
• привлечь к фирме большое количество заказчиков, тем самым увеличив прибыль;
• обеспечить продвижение продукции.

Большой популярностью пользуются блоги на сайтах, статьи которых непосредственно перекликаются с тематикой компании. Например, фирма по производству кухонь на заказ может размещать различные лайфхаки, касающиеся вопросов ухода за мебелью, популярных стилей в интерьере. А интернет-магазин, занимающийся продажей брендовой одежды, может делать обзор популярных коллекций именитых дизайнеров, модельеров, писать о специфике изготовления вещей. Написание подобных статей лучше заказывать у специалистов.

Каким должен быть дизайн веб сайта?

Для того, чтобы разработка дизайна сайта была качественной и эффективной, необходимо соблюдать ряд правил:

1. Страницы обязаны быстро загружаться. Поэтому нельзя перегружать портал графикой, видео и прочими деталями, которые тормозят работу ресурса. Также перед размещением веб-сайта в интернете необходимо в обязательном порядке провести оптимизацию кода и всех элементов графики, которые присутствуют.
2. В процессе разработки дизайна сайта учитывайте, что сайт обязан быть одновременно стильным, лаконичным, интересным, привлекательным. Его главная задача — обеспечить комфортное восприятие информации, поэтому его ни в коем случае нельзя перегружать. В то же время старайтесь сохранять тонкую грань между лаконичностью и примитивностью. Для продвижения сайта важно, чтобы он не казался посетителям слишком простым.
3. Присутствие анимации освежает, делает портал более живым и современным. Но в их создании специалисту также нужно соблюдать меру: если все будет мигать и двигаться, то пользователь не сможет ознакомиться с содержимым сайта.
4. Очень важную роль играет система навигации в изготовлении и разработке веб дизайна сайтов. Она обязана быть простой, удобной и понятной, чтобы у потенциального клиента не возникали вопросы относительно того, где найти интересующий его товар, и как оформить заказ. Вам необходимо предоставить возможность пользователю одним кликом попасть на главную или в интересующий его раздел. Также позаботьтесь о наличии системы поиска.
5. Сочетание цветов призвано обеспечить максимально комфортное зрительное восприятие. Не используйте более трех цветов при создании разделов и тщательно следите за тем, как они сочетаются между собой и с цветом текста.
6. При изготовлении портала шрифт текста следует выбирать средний, чтобы он не был слишком мелким или, наоборот, крупным. Весь контент лучше писать одним шрифтом, чтобы в итоге получить гармоничную подачу информации.
7. Создание сайта с индивидуальным дизайном предполагает, что все разделы обязаны смотреться гармонично и соответствовать единому дизайнерскому стилю. При переходе с главной страницы сайта на одну из внутренних, посетитель не может испытывать ощущение того, что он оказался на совершенно другом ресурсе.
8. Избавьтесь от навязчивой рекламы в проекте: постоянно всплывающие окна, информирующие об акциях, скидках и выгодных предложениях, а также редиректы на сайты рекламодателей не будут привлекать аудиторию, скорее отталкивать.
9. Дизайн сайта и информационный контент обязан полностью соответствовать выбранной тематике и направлению деятельности компании.
10. Портал должен корректно отображаться во всех браузерах и на всех устройствах: ноутбуках, планшетах, телефонах.

Встречают по одежке: профессиональная разработка дизайна сайтов

Как говорится, встречают по одежке, а провожают по уму. Это выражение непосредственно касается и интернет-ресурсов. В том, как именно их воспринимают пользователи, огромную роль играет их внешний облик — индивидуальный дизайн. Первый контакт посетителя с сайтом интернет-магазина осуществляется на основе визуального восприятия главной страницы и ее разделов. Если внешний вид будет презентабельным и интересным, человек захочет остаться здесь подольше и ознакомиться со всем содержимым.

Разработку дизайна веб сайта в Москве необходимо доверять опытному талантливому дизайнеру, так как именно от оформления зависит имидж фирмы. Я вполне могу назвать себя специалистом в этом деле, так как имею 20-летний опыт работы в данной сфере и применяю не только традиционные, проверенные способы при создании веб дизайна сайта, но и современные, инновационные технологии для продвижения. Я понимаю, что даже банальная гиперссылка, при правильном дизайнерском подходе, может превратиться в волшебный анимационный элемент, привлекающий внимание.

За годы существования моей студии я осознал одну простую вещь — создание качественного, интересного индивидуального сайта для интернет-магазина не может занимать один день. Именно поэтому всех своих клиентов я предупреждаю о том, что заказать срочные проекты у меня нельзя — я не выполняю разработку и создание дизайна сайта за рекордные сроки. Я не использую готовые шаблоны, а предпочитаю создавать эксклюзивный, неповторимый и оригинальный дизайн-проект, полностью соответствующий стилю и направлению деятельности компании. Перед тем, как приступить к работе, как дизайнер, я тщательно знакомлюсь с клиентом, с его целями, пожеланиями и товарами, которые предлагает фирма. Таким образом, я полностью погружаюсь в проект и создаю продукт, способствующий узнаваемости фирмы. Именно поэтому заказать разработку дизайна сайта в моей студии — будет правильным решением.

Что я вам предлагаю:

• Применение инновационных дизайнерских методик и технологий в создании дизайна интернет сайта, которые заявят вашей целевой аудитории, что вы следите за новинками и держите руку на пульсе прогресса.
• Использование различных интерактивных элементов, привлекающих внимание людей.
• Разработку графического дизайна сайтов и стильных ярких баннеров, которые за несколько секунд расскажут вашим клиентам о предлагаемых услугах и преимуществах сотрудничества.
• Адаптивный дизайн сайта — я учитываю различия в компоновке макета сайта под разные гаджеты, начиная от компьютеров, ноутбуков, и заканчивая планшетами и смартфонами. Поэтому гарантирую вам, что ваш сайт будет удобным в использовании вне зависимости от того, с какого устройства его просматривают.
• Вы можете заказать графический дизайн как многостраничного веб сайта, так и Landing page.
• Уникальность и оригинальность продукта.
• В список моих услуг входит не только авторский дизайн сайта, но и создание продукта под ключ. Воспользовавшись данным предложением, вы сэкономите средства и станете обладателем качественного, многофункционального, оригинального сайта компании или интернет-магазина.

Этапы работы над сайтом

Для того, чтобы выполнить заказ в соответствии со всеми требованиями и пожеланиями клиента, моя студия придерживается следующих этапов разработки дизайна веб сайта:

1. Предпроектный анализ
   Как я уже говорил, для меня самое главное — это познакомиться с клиентом, услышать и понять его. Поэтому разработка дизайна интернет сайта начинается с того, что я собираю подробную информацию о заказчике и его компании: задаю вопросы, прошу заполнить бриф, смотрю фирменный стиль фирмы и пр. Далее я анализирую рынок, изучаю конкурентов и зарубежные аналоги для того, чтобы найти наилучшее решение. После этого мы встречаемся с заказчиком, обсуждаем идеи и определяемся с направлением в котором будем работать.
2. Проектирование структуры сайта
   Этот этап призван обеспечить будущему сайту компании удобство использования. Следует понимать, что современный уникальный дизайн сайта — это не только стиль и красивая картинка. В первую очередь он обязан быть удобным, чтобы им мог воспользоваться даже ребенок. Все детали, акцентирующие внимание пользователей, должны быть направлены на целевое действие (регистрация, заказ, ознакомление с услугами). Более того, продвижение в поисковых системах совершенно невозможно без грамотной структуры сайта.
3. Разработка концепции главной страницы
   В авторском графическом дизайне интернет сайта важна каждая мелочь. Поэтому я тщательно прорабатываю основную концепцию: начиная с идеи и заканчивая подбором цветов и шрифта для текстового контента. Я создаю несколько вариантов, чтобы заказчик мог сравнить и выбрать тот, который ему кажется наиболее удачным. Моя главная задача — найти баланс между минимализмом, простотой и стильным, дорогим внешним видом.
4. Разработка дизайна разделов
   После утверждения концепции главной страницы я перехожу к рисованию иконок, пунктов меню и других уникальных элементов, которые обязательно обязаны присутствовать во внутренних разделах. Результат работы утверждается заказчиком и только после этого в PSD-формате передаются все исходники, которые необходимы для дальнейшего составления корпоративного сайта фирмы.

Я всегда рассчитываю на долговременное сотрудничество с клиентами, стараюсь установить доверительные, даже дружеские отношения. Если принципы работы моей студии вам близки — с нетерпением жду, что вы закажите авторскую разработку дизайн проекта сайта и оформите заявку.

Разработка Дизайна Приложения: Создание Крутого UI/UX

Мы все знаем, что красивый дизайн продает. Это верно и для разработки мобильных приложений. Если вы хотите, чтобы пользователи выбрали ваше приложение среди сотен других, нужно как можно скорее влюбить их в свой продукт. Как показывают исследования, пользователю необходимо всего 7 секунд, чтобы решить, нравится ему приложение или нет.

Чтобы привлечь и удержать пользователей, компаниям нужны профессиональные услуги разработки дизайна приложения. Поговорим о преимуществах UI/UX дизайна и как стартапы используют его, чтобы достичь успеха.

В чем разница между UI и UX?

Люди часто задаются вопросом, в чем разница между UI/UX. И есть ли она вообще? Пользовательский опыт и пользовательский интерфейс — звучит похоже, но на деле абсолютное разное. Однако, одно без другого не обходится. Сейчас объясним: 

Пользовательский опыт

Суть — помочь пользователям достигнуть главной цели: забронировать билеты на самолет, заказать еду или вызвать такси. Чтобы создать дизайн приложения — держите в голове нужды пользователей и делайте все, чтобы помочь пользователям “дойти до конца”. Использование приложения не должно быть похоже на IQ тест. Вот например, две опции доставки:

• та, где для регистрации нужен только ваш номер телефона
• или та, где прежде чем сделать заказ, нужно заполнить гигантскую форму с информацией о ваших контактах, адресе и еще кучей всего

Какое приложение вы предпочтете больше? Конечно, первое. Когда хочется есть, а времени на обед мало, некогда возиться со сложными формами регистрации. 

Пользовательский интерфейс

Это все элементы, которые видит пользователь, и с которыми взаимодействует. Например:

• кнопки
• текстовые поля
• чекбоксы
• слайдеры
• строки поиска
• тэги
• иконки

UI сфокусирован на том, чтобы сделать взаимодействие пользователя с продуктом приятным. Вспомните приложения, которые вам нравятся, вроде Airbnb, Telegram или Uber. Их дизайн простой, но симпатичный. 

Разбить большую задачу на более мелкие и не просить пользователя сделать больше необходимого — тонкое искусство UI/UX дизайна. Дизайнеры не гадают, что может понравиться пользователям — они используют свой профессиональный опыт и знания, и изучают потребности пользователей, чтобы создать продукт, который их удовлетворит.

Стадии UI/UX дизайна

Наймете ли вы фрилансера или профессиональное аутсорс агентство, этапы разработки дизайна приложения будут похожи.

Исследование

Первый шаг к крутому UI/UX дизайну — исследование рынка. Мы проводим маркетинговые исследования и изучаем аналогичные продукты конкурентов. Это помогает нам создавать решения, которые на шаг опережают других игроков на рынке. Плюс, знакомимся с бизнес-логикой продукта и требованиями клиентов. Если у вас есть референсы или конкретные требования к разработке дизайна приложений — предоставьте их как можно раньше. Так мы сможем лучше понять ваши потребности.

Вайрфреймы

Вайрфреймы показывают, как все экраны будут соединены и какие элементы они будут отображать: от кнопок и всплывающих окон до визуала и текста. Но пока без контента 🙂 Фотографии, видео, цвета и шрифты будут добавлены позже. Вайрфреймы нужны для демонстрации логики продукта — на этом этапе в черно-белом цвете, чтобы ничего не отвлекало от флоу.

Дизайн-концепт

Анализируем всю имеющуюся информацию и представляем 1-2 визуальных экрана, которые отражают стиль и юзер-флоу будущего продукта. На этих экранах можно увидеть основные элементы дизайна и их расположение. Они являются отличным инструментом для презентации идей заказчику. Прежде чем идти дальше, нужно все согласовать, поэтому дальше назначается созвон с командой и презентация концепта. Если все довольны, переходим к следующему шагу разработки дизайна приложений.

Визуальный дизайн

Визуальный дизайн — этап, где добавляются анимации, логотипы, цвета, пользовательские шрифты. В результате вы получаете красивый кликабельный прототип, который соответствует стилю вашего бренда и tone of voice. Его можно передать команде разработчиков или презентовать вашу идею инвесторам. Если вы еще не нашли надежную команду разработки, мы поможем вам с разработкой дизайна приложения.

Нужен ли вашему продукту UI/UX дизайн?

Разработка дизайна приложений занимает 1-2 месяца и стоит денег, поэтому некоторые стартаперы думают, что могут обойтись и без этого. Однако попытка сэкономить на одной из самых важных составляющих вашего приложения (которую пользователь может увидеть и потрогать!) — не лучшая идея. Профессиональный UI/UX дизайн — это не только красивый визуал, на нем строится логика продукта. Если вы не хотите, чтобы ваши клиенты разочаровались, вам нужен интуитивно понятный интерфейс, который могут создать только профессионалы.

Как UI/UX дизайн влияет на успех вашего приложения?

Исследование Forresterhttps://www.forrester.com/report/The+Six+Steps+For+Justifying+Better+UX/-/E-RES117708о рентабельности инвестиций UI/UX дизайна показывает, что в среднем каждый доллар, вложенный в UX, приносит 100 долларов. Представляете какая прибыль? Они также отмечают, что ведущие компании, инвестирующие в UX, превзошли индекс S&Phttps://ru.wikipedia.org/wiki/S%26P_500на 35%. Согласно их исследованиям, хорошо продуманный пользовательский интерфейс увеличивает коэффициент конверсии более чем на 200%. И если удалось увеличить удержание клиентов как минимум на 5%, прибыль увеличиться более чем на 25%. Довольные пользователи часто рекомендуют своим друзьям понравившиеся продукты. По данным Forrester, 23% клиентов, у которых был положительный опыт, рассказали об этом 10 и более людям.

Основные ловушки UI/UX дизайна:

Теперь вы знаете, насколько важно инвестировать в качественный UI/UX дизайн. Вот несколько примеров того, как плохой UI/UX может вас подвести.

• Вы не знаете чего хочет пользователь. Есть методы, которые помогают ставить себя на место пользователей, например, создание персон (образ пользователя) или написание пользовательских историй. Люди иногда бывают необъективны: вы можете всем сердцем любить свой проект, но это не значит, что он понравится и пользователям. Опросите реальных людей перед тем, как разрабатывать продукт. Много раз проверено: они могут удивить вас идеями, о которых вы даже не задумывались.
• Ставите креатив выше удобства. Ваше приложение может выглядеть потрясающе и выделяться на фоне других. Но если реальные пользователи не осознают его ценность, в чем смысл? Например, довольно часто компании вкладывают средства в создание кастомных шрифтов, которые пользователи будут ассоциировать с их брендом. Но слишком креативные шрифты часто трудно читать. Не забывайте, что продукт должен быть удобен для пользователей, а дизайн должен учитывать их потребности, а не только ваше желание самореализации.
• Реализуете не интуитивную навигацию. Пользователи имеют многолетний опыт взаимодействия с цифровыми продуктами. Они ожидают найти узнаваемые кнопки в определенных местах и перемещаться по экранам, используя интуитивно понятные механизмы (например, скроллинг или стрелки). Не нужно делать что-то в корне новое, потому что в итоге вы получите продукт с плохим юзабилити.

Работа с опытной UI/UX дизайн командой не даст вам попасть в эти ловушки.

Преимущества создания дизайна приложения для стартапа:

Если вам удастся избежать распространенных ошибок в UI/UX дизайне, вы уже на полпути к успеху. Поговорим о преимуществах UI/UX для бизнеса:

• Вам проще решать проблемы. Если вы с самого начала уделите пристальное внимание UI/UX дизайну и мнению пользователей, вы сможете найти проблемные моменты на ранних стадиях проекта. Чем раньше, тем легче их устранить.
• Вы получаете вдохновение для новых идей. Вдохновляйтесь отзывами конечных пользователей и реализуйте функции, которые им действительно нужны.
• Ваш продукт быстрее попадает на рынок. С готовым дизайн-концептом уже можно получить фидбек пользователей и понять, нужен ли ваш продукт рынку. Остается только передать его в разработку — обычно на это уходит 3-6 месяцев. 

Вложение времени и денег в создание дизайна приложения определенно окупится, к тому же у вас будет конкурентное преимущество.

Вывод

Создание дизайна приложения — незаменимый шаг к успеху проекта. Продуманная бизнес-логика и привлекательный визуальный дизайн увеличивают шансы вашего продукта найти свою аудиторию. Не пытайтесь сэкономить на дизайне пользовательского интерфейса, проводите все необходимые UI/UX исследования, чтобы создать интуитивно понятное приложение, которое понравится пользователям.

У вас есть идея для проекта?

X

как правильно выбрать курсы и программы обучения

От автора: как и любой другой индустрии, Интернету нужны мастера, которые будут над ним работать. Одной специальности здесь мало. Кто-то должен придумать концепт, кто-то оформить идею в рабочий макет, а кто-то — взять и построить приложение. Чтобы выполнить весь комплекс работ, люди должны владеть навыками и иметь соответствующий способ мышления: креативный художник или изобретательный программист. Если вы тоже не раз задавались вопросом «web дизайн и web разработка: что из этого моё?», значит, информация из статьи вам поможет определить дальнейший вектор развития.

Граница между дизайном и разработкой

Спойлер в самом начале статьи: сегодня грань может быть весьма зыбкой. Завтра программист станет дизайнером больше, чем сегодня. Технологии развиваются, а требования к профессионалам растут. Компетенция современного разработчика тесно переплетается с навыками дизайнера. Но для того чтобы уже сегодня читатель смог выбрать курсы, на которые он запишется завтра, проведем конкретную грань.

Дизайн — это тоже разработка?

Новичков удалось удивить названием, не так ли? Этого и добивались. Ведь в установлении разницы между этими понятиями многие пытаются поставить знак ≠. Что ж, такой подход облегчает восприятие, но не передает реальную суть. Самое печальное, что подобные высказывания звучат в программах подготовки специалистов. Но сегодня сможем показать верный путь.

Веб-дизайн — это один из этапов веб-разработки, или отрасль, если уже говорить о обучении. Дело в том, что создание (разработка) веб-приложения или сайта состоит из проектирования внешнего вида, верстки фронта и программирования. Так что, дизайнеры, не позволяйте сравнивать себя с разработчиками, ведь вы коллеги, с точки зрения логики.

JavaScript. Быстрый старт

Изучите основы JavaScript на практическом примере по созданию веб-приложения

Узнать подробнее

Профессионалы этой отрасли должны обладать определенным уровнем знаний для создания самой структуры страницы (хедер, секции, футер, меню, навигация), понимания, как лучше подать информацию пользователю, и, наконец, красивого оформления созданного проекта. Это требует понимания технических основ процесса. Ведь рисовать то, что будет работать медленно, или то, что сложно для реализации — неверный шаг. Потому курсы по веб-дизайну пользуются невероятной популярностью: самостоятельно понять тонкости работы, не имея практического опыта, сложно.

Как правило, веб-дизайнерами становятся технически подкованные люди, которые имеют хорошо развитое художественное воображение. Совсем не обязательно быть живописцем. Но некоторыми врожденными качествами нужно обладать. В этом ключевая разница, если говорить о программистах: дизайнером проще родиться, чем стать. Среди обязательных характеристик будущего веб-художника:

усидчивость и терпеливость. Быть веб-дизайнером — это пробовать несколько вариантов, дорабатывать, знакомиться с новыми программами и инструментами;

умение разбить работу на этапы. Перед тем как начать обучение, определите, умете ли вы системно подходить к выполнению задачи. Тайм-менеджмент и организация труда — это то, что делает талантливого человека профессионалом;

нестандартное мышление. Нет, речь идет не о причудливости, которую приписывают артистам. Компетентный дизайнер умеет создавать уникальные продукты. Умение работы с шаблонами, их сопоставление и реализация оригинального дизайна — хороший навык. Но даже для этого нужно уметь мыслить, как дизайнер;

постоянная жажда обучения. Хороший слесарь в свободное время читает журналы о технике. Так и дизайнер должен постоянно следить за новинками и тенденциями. Сайты, которые были созданы в 2007, тоже были трендовыми. Сегодня курс развития изменился. Нарисуйте приложение старого образца, и вас посчитают некомпетентным.

Выбирать направление обучения «веб-дизайн» — означает использовать свои творческие возможности по максимуму. Будьте готовы к тому, что тот макет, который вы считаете идеальным, не будет принят заказчиком или разработчиком следующего звена. И никому не будет разницы, сколько времени вы потратили на создание, какими принципами руководствовались. «Не нравится» и «не подходит» — это понятия, которые не знают объективности.

Программист-разработчик

Теперь немного больше поговорим о подмене понятий, которую нам придется принять. Веб-разработка — это создание приложения от начала до конца. Она включает все этапы от идеи, до управления контентом с помощью CMS. Согласно определению, даже копирайтер является разработчиком веба. Но если мы пойдем таким путем, то не рассмотрим вопрос, который стоял с самого начала: веб-разработка или веб-дизайн? Да, это неверное толкование. Да, все что будет сказано далее, основано на заблуждении. Но это настолько принято обществом, что уже почти считается правдой. Так что, выхода у нас нет .

Под веб-разработчиком понимают специалиста, который проводит верстку приложения с макета, разрабатывает интерактивные элементы страниц, пишет программы для серверной стороны и поддерживает проект в течении его работы. Вышеперечисленные этапы могут выполняться как фуллстаком, так и узкими специалистами, но об этом позже.

Обучение веб-разработчика может оказаться еще более тернистым, чем подготовка дизайнера. В дизайне все просто: не хочешь рисовать — значит, ничего не получится. Человек сразу чувствует неладное, если создание макетов — слишком «неродной» труд. С веб-разработкой иначе. Чтобы стать программистом или верстальщиком, вам нужен лишь достаточный уровень интеллекта, усидчивость и, самое главное, умение долго идти к своей цели, даже если очень трудно.

JavaScript. Быстрый старт

Изучите основы JavaScript на практическом примере по созданию веб-приложения

Узнать подробнее

Вся веб-разработка — это решение проблем системы оригинальными и эффективными способами. Несмотря на то, что существует множество готовых решений, вы постоянно будете сталкиваться с новыми неурядицами. Несложно выучить язык программирования, несложно понять, как система работает. Но на формирование стиля мышления, который способен в короткий срок преодолеть трудности разработки, уйдут годы. В этом и заключается компетентность супер-разработчика.

Навыки специалиста

И так, вы решили освоить одну из профессий: веб-разработка или веб-дизайн. Что же выбрать? Ответ на этот вопрос лежит не только в том, что вы считаете наиболее подходящим лично для себя. Намного более адекватно можно оценить направление развития, если взять и начать учиться в двух направлениях. Как выбрать правильные курсы обучения, вы узнаете ниже.

Начни с простого: первые шаги веб-разработчика

Если вы еще не знаете, насколько это разносторонняя сфера, значит все только впереди. Наверняка, трудно было бы даже создать специальность в университете, название которой «веб-разработка». Дело в том, что время, когда один разработчик мог решать большинство проблем приложения, уже давно прошло. Разделение труда на различные отрасли теперь является эталонным для эффективного создания программы под веб.

Как вы могли слышать ранее, разработчики делятся на специалистов серверной и клиентской сторон. Лучший способ понять грани компетенции каждого из них — это начать обучение. Да, различных технологий много. Но можно придумать курс ознакомительного обучения, с которым вы поймете, какой из сторон хотели бы служить.

Представим, что вы уже знаете спарку HTML/CSS. Если еще нет, то потратьте на технологии два дня, и они у вас в кармане. Нет разницы, даже если вы хотите стать дизайнером. Такой навык не помешает, ведь даст понимание того, как будут расположены элементы макета в будущем.

Теперь переходим к хардкору. Пока не знаем, что вы будете учить далее, но уже приступайте к изучению JavaScript. Да, это преимущественно инструмент фронтендщика. Но, изучив JS, вы познакомитесь с типизацией данных, эталонным синтаксисом и хоть немного осознаете сложность процесса. Если этот этап пройден успешно, и вы пишете неплохие программы на этом языке, значит вы видите, как работают клиентские скрипты. Интересно работать на фронтенде? Продолжайте обучение.

В случае стремления к чему-то другому изучите один из языков для бэкенда. Это может быть веб-язык PHP или любой из языков программирования общего назначения. Советуем выбрать Java, Python или C/C#/C++. Дело не в том, что они лучше, чем PHP (быстрые и мощные), а в том, что с такими знаниями легче реализовать себя в альтернативных сферах. Ну, а если судьба заставит работать с PHP, то со знанием «взрослого» PL, обучение на «препроцессоре» не займет больше недели.

Если даже бэкенд не привлек ваше внимание, значит, веб-разработка просто не для вас. Хотите программировать? Есть масса отраслей, где вы можете применить приобретенные знания, но сегодня не об этом.

Что постигнуть дизайнеру?

Photoshop, Illustrator, GIMP или любой другой графический редактор. Разница лишь в том, что именно вы хотите рисовать и какой из интерфейсов выучите быстрее всего. В любом случае, начать лучше с Photoshop. Он наиболее универсален из всех представленных на рынке.

Но одного только умения пользоваться редактором мало. Впереди обучение, в котором вы узнаете о совместимости цветовых схем, разработке согласно принципам юзабилити, адаптивности, кроссплатформенности и прочих необходимых сегодня элементов дизайна. Но, чтобы понять, хотите ли вы стать профессионалом сферы, пройдите курсы создания простых макетов сайта. Как только вы смастерите собственный макет, то поймете, лежит ли душа к такому виду деятельности.

А если одновременно?

Стремление к фуллстаку — это стремление к свободе. Человек хочет быть независимым от других специалистов, самостоятельно принимать решения о судьбе проекта. Но идти к полноценной компетентности в сфере веб-разработки на начале пути — неразумно. На рынке труда нужны спецы, которые безупречны хотя бы в чем-то одном. Тем не менее, осваивать технологии поэтапно, системно, одна за одной — путь к настоящему успеху.

Сегодня не удивишь фронтендщиком, который и макет поправит, и в бэк-энд без страха заглянет. Но такой уровень знаний требует длительного обучения и практики.

Шанс для оффлайна

Впервые курсы могут стать приемлемым вариантом. Но уж точно не для веб-разработки. Зато для дизайна — самое оно. Работа в группе стимулирует творческий мыслительный процесс, позволяет быстрее применить знания на практике и, в целом, оптимизирует обучение. Если вы хотите стать дизайнером, освоили основные инструменты и желаете почувствовать разницу между заурядным и уникальным дизайном, тогда школа — отличный выбор.

Хорошие веб-художники получаются с студентов ВУЗов, которые обучались по программе «графический дизайн». Здесь можно получить знания об основных принципах построения иллюстрации во всех сферах. Кстати, веб-дизайн считается разновидностью графического дизайна.

Вот и все! Выбирайте то, что по душе, и развивайтесь в выбранном направлении!

JavaScript. Быстрый старт

Изучите основы JavaScript на практическом примере по созданию веб-приложения

Узнать подробнее

Освойте востребованные навыки дизайн и верстки

Комплексный процесс дизайна и верстки на примере лендинга!

Смотреть

Разработка дизайн-проекта

Разработка дизайн-проекта

+7 495 280-0000 с 9 до 21 Бесплатный выезд специалиста по Москве и области   Исполнение дизайн-проекта осуществляется в соответствии с заданием на дизайн-проект и включает в себя комплекс следующих услуг: Обмеры помещений и предоставление планировочных решений. Разработка эскиза дизайн-проекта помещений. Разработка проектной документации к дизайн-проекту. Разработка дизайн-проекта идёт под Вашим постоянным контролем, с учётом вносимых корректив и пожеланий, а также новых идей дизайнера. Возможен дальнейший архитектурный надзор дизайнера за реализацией проекта или полная реализация проекта силами специалистов Компании Абада. Также можете увидеть интерьер своей мечты своими глазами, заказав 3D-визуализацию дизайн-проекта.   Примеры дизайн-проектов по организации малогабаритного пространства Помещение 23 кв.м. Гостиная и спальня. Зонирование пространства. было стало проект всей квартиры воплощение дизайн-проекта Помещение 4,9 кв. м. Санузел. дизайн-проект фото реализованного проекта с разных ракурсов Организация рабочего пространства помещения кухни площадью 9 кв.м было стало воплощение дизайн-проекта   +7 495 280-0000 с 9 до 21 Бесплатный выезд специалиста по Москве и области

Разработка дизайна сайта макет структуры сайта

Дизайн-макет сайта – это визуальный образ будущего сайта, разработанный с учетом технических возможностей HTML верстки.  Такой макет является демонстрацией того, как визуально будет  выглядеть ваш сайт после верстки и наполнения.

Макет представляется в виде картинки, которая будет отображена в интернет браузере, без активных кнопок и других динамических элементов.

Специфика разработки графического дизайн-макета применительно к сайту представляет из себя сочетание технических и визуальных параметров будущего сайта. Это проработка расположения и размера элементов  сайта с точки зрения  удобства поиска и использования информации на сайте.

Основой для разработки дизайн-макета сайта являются предоставленные заказчиком материалы: логотип, слоган, фирменные (или предпочтительные) цвета, графические элементы, фотографии и другие элементы дизайна, а также заполненная клиентом анкета.

Задать вопрос

Структура сайта – тщательно проработанное расположение всех элементов, с учетом принципов будущей верстки.  Есть 2 основных вида структуры :

• «резиновый  сайт» — все элементы сайта наполняют весь монитор по ширине и «тянутся»  при ее увеличении.
• «центрированный сайт» — все элементы расположены по центру на ширине 980px, на более широких мониторах расширяется только фон.

 

У каждого из этих решений есть свои достоинства и недостатки, они обязательно должны быть учтены при выборе типа структуры.  Определить, какой тип структуры будет у сайта, необходимо  перед  разработкой дизайн-макета. 

!	Компания OKsoft предлагает комплексную работу — разработка структуры сайта и создание дизайн-макета. На наш взгляд это оптимально.

Пример структуры сайта:

 

Пример дизайна, разработанного на основе данной структуры:

Вариант макета сайта – макет с одной схемой расположения элементов сайта, повторяющихся на каждой странице.

В большинстве современных сайтов используется 2 варианта дизайна – один вариант для главной страницы, и один вариант для всех внутренних. В отдельных случаях необходимы дополнительные варианты дизайна для одного сайта, например дизайн каждой страницы сайта.

При разработке дизайн-макета сайта учитываются нюансы HTML верстки, в этом основное отличие дизайна сайта от других видов дизайна.

Сколько разрабатывается макетов?

Стандартно мы предлагаем разработать последовательно 3 варианта  дизайн-макета, каждый последующий из которых выполняется на основе комментариев к предыдущему.  При четко проработанной структуре  сайта и наличии фирменного стиля это оптимальное количество для достижения результата. Выбранный дизайн-макет дорабатывается с учетом пожеланий заказчика.

 

!	Особо стоит отметить, что в рамках разработки дизайн-макета сайта мы разрабатываем только дизайн-макет сайта. Мы не работаем над цветом логотипа, не разрабатываем фирменный стиль и цвета, не создаем рекламную концепцию бренда, не подбираем фотоизображения и т.д. Все это – отдельные работы.

 

Когда мы предоставим созданный макет сайта?

Сроки работ – первый макет мы предоставляем через 7-10 рабочих дней после урегулирования организационных моментов, таких как подписание договоров, проведение расчетов, предоставление материалов. Разработка каждого последующего  макета занимает 5-7 рабочих дней в зависимости от количества внесенных рекомендаций.

Как создается грамотный дизайн сайта?

• Задача на разработку дизайна должна быть конкретной и детально проработанной. В нашей компании создана анкета (бриф), который заполняет клиент;
• Исходные материалы должны быть хорошего качества. Материалы предоставляются клиентом или создаются дополнительно. Графические и фотоизображения при необходимости приобретаются в фотобанках. Текстовые материалы желательно готовить заранее с привлечением профессионалов по теме;
• При создании сайта мы всегда думаем о том, как он будет в дальнейшем использоваться, кто будет его посещать, кто  размещать  информацию. Дизайн сайта — это отражение компании в интернете, и мы всегда стремимся, чтобы сайт приносил заметные  результаты.

 

Сайт – это соединение дизайна и технологии. Современный сайт все чаще  представляет собой не просто визитку или каталог, а серьезный технический проект с разветвленной навигацией и множеством функций.  Интернет-магазины, личные кабинеты со статистической информацией, и так далее.  Дизайн сайта должен отвечать требованиям отрасли, быть привлекательным для потребителей, решать задачу рекламного характера для владельца разработанного сайта, а также  быть интуитивно понятным и простым с точки зрения использования.

Основные виды сайтов, которые мы разрабатываем:

 

• Сайт-визитка. Удобный формат для небольшой или  стартующей компании.  Разработка такого сайта, как правило, стоит недорого, времени затрачивает немного, и дает возможность владельцу сформулировать вектор дальнейшего развития собственного представительства в сети Интернет;
• Сайт компании. Предполагает множество страниц информационного содержания, каталог продукции или описание услуг, фотогалерею, портфолио, новостной и другие разделы. Сайты компаний могут быть довольно объемными и требовать серьезной технической поддержки и проработки отдельного дизайна для внутренних страниц;
• Интернет-магазин.  Мы разрабатываем сайты с интернет-магазинами различного объема и функционала. Собственная разработка OKsoft позволяет работать с товарной базой быстро и удобно.  Мы можем сделать интернет-магазин как открытым, так и в закрытой зоне сайта, с дифференцированными ценами и другим функционалом.

 

Мы разрабатываем и другие красивые и удобные сайты различных тематик и объема, требующие как серьезных технических проработок, так и простые сайты из нескольких страниц.  Мы  создадим привлекательный, правильный  дизайн, проработаем архитектуру и грамотное расположение элементов. Ваш сайт будет радовать вас своей эффективностью.

 

Процесс проектирования: разработка дизайна

Каждый дизайн-проект уникален, но процесс проектирования здесь, в Moss, следует четко определенному пути.

Вот что вы можете ожидать от каждого этапа, от Program и Field Measuring до Schematic Design , Design Development и Строительная документация и далее до Разрешения и Construction Администрация . Между совещаниями по дизайну мы работаем над вашим проектом на каждом этапе.

В этой серии статей мы исследуем наш подход к процессу проектирования и дадим вам представление о том, как мы могли бы справиться с будущим проектом , вашим .

Разработка дизайна: фокус и решения

После того, как схематический дизайн был завершен, все согласились с масштабом и объемом дизайна, а также с общим направлением, в котором будет развиваться проект.Предстоит проработать еще много деталей. Выполнив большую часть схемотехнического проектирования вручную, мы обычно переводим проект на компьютер, чтобы иметь более точные размеры — убедиться, что все подходит. Остальные элементы обрабатываются на компьютере или ручкой в ​​зависимости от проекта. Мы начинаем принимать твердые решения о материалах — из чего сделаны вещи — и начинаем отслеживать возможные варианты отделки и приспособлений.

Опять же, чтобы проиллюстрировать, мы покажем контент, созданный для двух наших проектов — дома на Кармен-авеню и нового ресторана и рынка деликатесов в Андерсонвилле.

Поэтажный план

При разработке дизайна мы создаем планы этажей на компьютере — где мы можем быть уверены, что все размеры точно отмечены — мы все еще можем реорганизовать части плана этажа, но теперь общий план установлен. Мы добавляем размерные линии, чтобы показать расположение стен и других структурных элементов, и мы используем точно выверенные макеты мебели и других ключевых предметов, которые должны быть включены в окончательный проект. Ниже представлен план первого этажа дома на Кармен-авеню.На данный момент план довольно чистый — несколько размеров и текстовых меток. (Примечание: к тому времени, когда он дойдет до фазы Строительной документации, он будет ПОЧТИ нечитаемым загроможденным важной информацией, следите за обновлениями, чтобы увидеть следующий пост, чтобы объяснить весь этот беспорядок).

План этажа ресторана в Андерсонвилле ниже немного более детализирован — он уже показывает точное размещение всего кухонного оборудования (они помечены номерами, ведущими к дополнительной информации в другом месте), места для всех сидячих мест в ресторане и соответствует требованиям ADA. туалеты и безопасные для жизни пути выхода.

Планы этажей

на этапе разработки дизайна призваны уловить все важные детали, чтобы, как только мы начали выяснять, как механические, электрические и сантехнические системы, детали отделки и нестандартная мебель будут вписываться в них, нам не придется менять вещи в 14 разных местах, потому что был пропущен главный пункт программы.

Разрезы и отметки

Когда мы достигнем этой точки ясности с планами этажей, мы сможем использовать разработку дизайна как время, чтобы серьезно задуматься о том, как будет выглядеть внешний вид здания.Дизайнеры используют фасады — плоские виды каждой стороны здания без перспективы — для изучения этих экстерьеров. Иногда это сначала делается вручную, как, например, карандашные наброски дома на Кармен-авеню ниже.

Чертежи в разрезе в верхней части столба показывают несколько различных идей для проектирования линии крыши, каждая из которых использует один и тот же «окончательный» схематический план этажа.

В других случаях мы работаем непосредственно с компьютерной программой рисования (САПР) для их создания.Часто различные варианты планировки фасада идут рука об руку с решениями о материалах, которые будут использоваться снаружи. Мы снова обращаемся к фотографиям наших собственных или других проектов, которые нам нравятся, чтобы проиллюстрировать, как могут выглядеть эти материалы.

Материалы

Мы начинаем назначать материалы для основных конструкций здания — кирпичных стен на пристройке, живая крыша, например — во время разработки проекта. И в то же время мы начинаем определять, где внутри может быть декоративная плитка, какие полы будут деревянными или бетонными и из каких встроенных элементов могут состоять.Приведенное ниже исследование относится к реконструкции жилого дома на Семинарии-авеню, которая сейчас находится в стадии разработки.

Работа с аннотированными эскизами, часто с фотошопом различных материалов прямо в чертежи, — хороший способ передать представление о том, как будет построен элемент, и убедиться, что все находятся на одной странице с дизайном. На представленном ниже эскизе показана концепция центрального бара ресторана Andersonville, показывающая как планировку, так и то, где можно использовать такие материалы, как вторичный деревянный сайдинг и столешница из цинка.

На основе этого выбора мы переходим к выбору конкретных продуктов, которые будут обозначены в строительной документации. Мы также используем Basecamp, нашу надежную веб-систему для управления проектами, чтобы делиться идеями по поводу потенциальных спецификаций — приспособлений, отделки и продуктов — с клиентами и отслеживать их в офисе.

Переход от разработки дизайна

Движущей силой этапа разработки проекта, помимо продвижения концепции проекта с клиентами, является сбор достаточной информации о будущем здании, чтобы можно было точно оценить его стоимость.Таким образом, заключительный документ представляет собой «Прайс-лист» чертежей, как в компьютере, так и с иллюстративными эскизами любых встроенных элементов, изготовленных по индивидуальному заказу. Это позволяет нам проверить оставшуюся сметную цену за квадратные футы от Schematic Design и подтвердить, что мы идем в соответствии с бюджетными целями.

Первые две фазы, схематический дизайн и разработка дизайна, требуют наибольшей обратной связи и взаимодействия с нашими дизайнерами. После того, как мы определились с основным планом проекта здания и пришли к выводу, что он соответствует бюджету, мы немного углубимся внутрь и приступим к работе по подготовке подробных чертежей для городского строительного управления и для подрядчиков для использования в воплощение нашего дизайна в реальность.

Следующий шаг… Строительная документация.

Теги: Basecamp, Процесс проектирования, Приспособления, Материалы, Чертежи, САПР, Вдохновение, Примеры, Дизайн-мышление, Разработка дизайна, Планы этажей, Фасады, Отделка

Схема

; Развитие дизайна; Строительная документация

Понимание этапов проектирования архитекторов: схематический дизайн; Развитие дизайна; Строительная документация

Этапы проектирования архитектора

Работа с архитектором кажется сложным процессом, верно? Но знаете ли вы, что большинство архитекторов используют типичный процесс проектирования для завершения проектных услуг для вашего нового дома? Зная только основы, прежде чем поговорить с вашим архитектором, процесс будет казаться намного менее пугающим.

Обычно архитектор выполняет 5 этапов для завершения проекта. Однако в небольших проектах, таких как новые дома, я обычно нанимаю только 3 из них:

Схема:

Схематическое проектирование — это первая фаза. На этом этапе архитектор разговаривает с заказчиком, чтобы определить требования и цели проекта. Архитектор обычно начинает с черновых эскизов, которые иллюстрируют основные концепции проекта.Чаще всего сюда входят пространственные отношения, а также базовый масштаб и формы, которые может пожелать владелец. Кроме того, на данный момент завершено первоначальное исследование правовых норм. Первоначальные оценки затрат также исследуются на основе общего размера и сложности проекта.

Schematic Design часто создает грубые чертежи плана участка, планов этажей, фасадов и часто иллюстративные эскизы или компьютерные изображения. Смотрите примеры дизайнов / поэтажных планов.

Разработка дизайна:

Разработка дизайна собирает результаты этапа схематического проектирования и продвигает их еще на один шаг вперед. Этот этап включает завершение проекта и определение таких элементов, как материалы, расположение окон и дверей, а также общие структурные детали.

Разработка проекта обычно дает более подробный план участка, а также планы этажей, фасады и чертежи разрезов с полными размерами.

Это канадский проект деревянного каркаса дома у озера для дома в Альберте, который можно посмотреть здесь.

   Посмотреть еще Планы дизайна жилых домов Canadian Timberframes   

Строительная документация:

Когда архитектор и заказчик ознакомятся с чертежами, полученными на этапе разработки проекта, они могут переходить к строительной документации.На этапе строительной документации создаются гораздо более подробные чертежи, которые используются для строительства вашего проекта. Эти чертежи обычно включают спецификации деталей конструкции и материалов. После того, как компакт-диски готовы, архитекторы отправляют их подрядчикам для определения цены или проведения торгов, а также в строительный отдел для получения необходимых разрешений.

Строительная документация часто включает полный набор архитектурных чертежей (план участка, планы этажей, разрезы, детали и т. Д.), которые объединены со структурными чертежами (и, возможно, механическими и электрическими чертежами), которые содержат достаточно деталей, чтобы подрядчик мог построить ваш проект.

Другие фазы:

В более крупных проектах может быть фаза торгов или переговоров, а также услуга фазы строительства. Обычно они не используются в небольших домашних проектах, но они являются важной частью более крупных жилых, коммерческих или промышленных проектов.

Строительство:

Итак, вот оно.Вкратце, это полный процесс оказания услуг архитекторам. Если вы будете в курсе всего этого процесса, мы надеемся, что это поможет вам избавиться от беспокойства по поводу вашего нового дома!

Bear Rock в Нью-Гэмпшире — это пример одного из домов, которые я спроектировал с использованием канадских деревянных каркасов, и опубликовал его чертежи.

Разработка концептуального и детального проектирования

Основы проектирования (BOD) / Концептуальное проектирование

Фаза Основы проектирования (BOD) GPS согласовывает корпоративные стандарты, предпочтительные продукты и проверенные в отрасли методы наших клиентов с требованиями проекта для формулирования оптимального BOD фундамент для проекта.Этот процесс включает в себя:

• Создание схематического проекта с четкими и лаконичными эскизами, графикой, общими критериями проектирования и предварительной сметой
• Определение требований к конструкции, включая пространство и проходы, потребляемую мощность и тепловые нагрузки, конструкцию помещения и стен, тип пола и отделка потолка (т.е. рассеивание статического электричества, чистый, твердый настил, фальшпол, освещение)
• Определение всех сетевых параметров для проекта, включая количество местоположений розеток, количество и тип подсетей, размер магистрали и резервную емкость
• Определение требуемый уровень резервирования объекта на основе потребностей клиента и критически важных требований
• Разработка технической спецификации и начальных чертежей AutoCAD для рассмотрения с клиентом

Разработка рабочего проекта (проектирование / проектирование)

Этап разработки рабочего проекта дает результаты для GPS клиент, который включает в себя подробные проектные чертежи, спецификации ns и бюджетную смету заявки / тендера по проекту. Siemon GPS выполняет необходимую комплексную проверку для определения всех аспектов. монтажа кабельной системы, интеграции с другими дисциплинами, спецификациями материалов и подключением уровней 2 и 3. Чертежи и спецификации проекта четко задокументированы для совместного рассмотрения и уточнения до окончательной версии. дизайн согласован со всеми заинтересованными сторонами. Выпускаются окончательные версии чертежей и спецификаций (IFB — Информация для предложения) для включения в пакет предложений. Эта фаза разработки дизайна может быть последующей процедурой после оценки. и основу дизайна или отдельный запрос от заказчика.Стандарты критериев проектирования и типовые чертежи включают:

• Требования к пространству для комнат и проходов, как внутри завода, так и за его пределами
• Применимые международные стандарты и нормы, методы строительства, кабельная продукция, продукты для стоек и проходов
• Список применимых утвержденных частей, концевых заделок и методы монтажа, конструкции помещения и методы отделки, а также требования MEP
• Схема прохода для всех магистральных, горизонтальных, зональных и распределительных точек
• Требования к телекоммуникационному пространству и высоте стоек, а также маркировка / администрирование, соединение и заземление и требования к противопожарной защите

Интегрированные системы / конвергентные ИТ

На этапе проектирования проекта GPS проводит тщательный анализ, чтобы определить, можно ли интегрировать дополнительные услуги для работы в инфраструктуре уровня 1 и, таким образом, сократить необходимое количество этапов установки и несопоставимых кабельные системы чтобы предложить экономию как капитальных, так и эксплуатационных затрат. Некоторые из систем, которые GPS рекомендует использовать в общей инфраструктуре уровня 1, включают:

• Системы безопасности, такие как видеонаблюдение и контроль доступа
• Низковольтное цифровое светодиодное освещение и управление
• Аудиовизуальные приложения
• Системы управления зданием, такие как HVAC
• Обнаружение пожара (в зависимости от страны и кода)

Разработка рабочего проекта после тендера

Изменения в конструкции часто происходят после завершения тендерного процесса, Siemon GPS работает с клиентом и всеми заинтересованными сторонами для эффективного управления этим изменением, Стоимость проекта может расти без формальных и контролируемых процессов управления изменениями. Siemon GPS помогает соблюдать протоколы управления изменениями клиентов, чтобы сократить увеличение бюджета и удовлетворить требования клиентов.

Изменения в конструкции документируются, и в спецификации и чертежи проекта вносятся изменения, которые официально утверждаются и подписываются клиентом, а также окончательный пакет «Для строительства» выдается монтажной компании.

Изменения, следующие за этой финальной версией, обычно затем следуют согласованной конструкции и системам управления изменениями клиентов.

Проектирование и разработка систем | Корпорация MITRE

Определение: Проектирование системы — это процесс определения компонентов, модулей, интерфейсов и данных для системы, удовлетворяющей заданным требованиям.Разработка системы — это процесс создания или изменения систем, а также процессов, практик, моделей и методологий, используемых для их разработки.

Ключевые слова: подрядчик, дизайн, анализ проекта, разработка, оценка, требования, спецификации, соломинка, прослеживаемость, валидация, верификация

MITRE SE Роли и ожидания: Ожидается, что системный инженер (SE) MITRE будет хорошо понимать, что системные требования должны передать, что составляет хорошее системное требование, как определить плохо написанное заявление о требованиях и что составляет хороший набор системных требований. Ожидается, что компании MITRE SE смогут преобразовать бизнес / миссию и операционные потребности в системные требования. Обычно компании MITRE SE возглавляют или активно участвуют в усилиях офиса программы государственных закупок по разработке этих требований. В совокупности описания и ограничения, составляющие технические требования на уровне системы, являются одними из наиболее важных продуктов, которые MITER может разработать для заказчика.

Ожидается, что

MITER SE будут руководить усилиями правительства по созданию реалистичных проектов верхнего уровня и связанных с ними мероприятий по снижению рисков, чтобы планирование было основано на реалистичной основе.Прогнозы затрат, графика и производительности, основанные на проекте системы верхнего уровня, могут способствовать снижению рисков программы и управлению ими. Ожидается, что компании MITRE SE смогут оценивать проектные и конструкторские работы подрядчика и влиять на них, в том числе проводить независимую оценку производительности и руководить группами по анализу проекта. В некоторых программах подрядчики будут нести основную ответственность за проектирование верхнего уровня, а компании MITRE SE будут руководить и проверять свои усилия. В других программах правительство разработает проект верхнего уровня в рамках своей ранней деятельности по системному проектированию.Часто MITRE играет ведущую роль или несет существенную ответственность за разработку системы высшего уровня правительства.

Предполагается, что

MITRE SE должны понимать важность системного проектирования для выполнения миссии и целей правительства. Ожидается, что они смогут анализировать предварительный проект подрядчика и влиять на него, чтобы он соответствовал общим бизнес-целям или задачам спонсора, заказчика и пользователя. Ожидается, что MITRE SE смогут рекомендовать изменения в проектной деятельности подрядчика, артефакты и результаты для устранения недостатков производительности и сообщать спонсору или заказчику, если недостаток производительности приведет к созданию возможностей, поддерживающих требования миссии, независимо от того, является ли дизайн соответствует техническим требованиям. Ожидается, что специалисты MITRE SE будут мыслить лидерами в оказании влияния на решения, принимаемые в правительственных группах по анализу проектов, и будут надлежащим образом привлекать специалистов по инженерным специальностям.

Контекст

Основные виды деятельности в области проектирования и разработки систем включают разработку технических требований на уровне системы и проектов систем верхнего уровня, а также оценку способности проекта соответствовать системным требованиям.

Технические требования на уровне системы описывают потребности пользователей и предоставляют информацию для готовой системы, чтобы соответствовать законодательным ограничениям, соблюдать правила и эффективно взаимодействовать или интегрироваться с другими системами.Их используют несколькими способами:

• Правительством для приобретения возможности, системы или продукта для удовлетворения потребностей пользователя.
• В рамках тендера на закупку или создания прототипов / экспериментов.
• Поставщиками продуктов в качестве критериев их проектирования.

Решения, принимаемые при определении технических требований на уровне системы, могут влиять на количество потенциальных решений, техническую зрелость потенциальных решений, стоимость системы, развитие системы, а также время и этапы разработки.

Технические требования системного уровня являются критическим предшественником и основой проектирования и разработки системы. Разработка системы верхнего уровня, как правило, находится под руководством правительственной группы и представляет собой независимый прогноз правительственной группы о том, как система может быть реализована для удовлетворения требований с приемлемым риском. Основная причина разработки системного проекта верхнего уровня — обеспечение технической основы для планирования программы. Это де-факто технический подход правительства к удовлетворению потребностей клиентов.Проект системы верхнего уровня, разработанный на ранней стадии программы приобретения, может использоваться для оценки осуществимости системы и обеспечения некоторой уверенности в том, что реализованный проект будет удовлетворять системным требованиям. Выполненные на ранней стадии программы усилия правительства по проектированию могут стать мощной основой для разработки основанных на фактах государственных прогнозов стоимости, графика, производительности и рисков, а также могут обеспечить основу для последующих усилий подрядчика по проектированию.

Прослеживаемость требований — это критически важная деятельность во время проектирования, разработки и развертывания возможностей, которая начинается с преобразования эксплуатационных потребностей пользователей в технические требования и распространяется на весь жизненный цикл системы.Это метод разработки содержательной оценки того, удовлетворяет ли поставленное решение эксплуатационным потребностям. Прослеживаемость также является основой процесса изменений в рамках проекта или программы. Без возможности отслеживать требования от начала до конца невозможно эффективно оценить влияние изменений. Кроме того, изменение следует оценивать в контексте сквозного воздействия на другие требования и общую производительность (например, см. Раздел SEG Enterprise Engineering). Этот двунаправленный поток требований должен тщательно контролироваться на протяжении всего проекта / программы и сопровождаться хорошо управляемым базовым уровнем требований.

Статьи в этой теме освещают важные элементы проектирования и разработки систем. Статья «Разработка технических требований на уровне системы» содержит рекомендации по выбору правильного уровня детализации при написании технических требований, выделяет общие проблемы в достижении согласия заинтересованных сторон по требованиям, предлагает способы их решения и предоставляет контрольный список, который поможет убедиться, что все основы были соблюдены. рассматривается при разработке требований системного уровня. Статья «Разработка проекта системы верхнего уровня» содержит рекомендации по раннему проектированию.Статья написана с точки зрения проектной деятельности внутри компании, но многие из передовых практик и извлеченных уроков могут быть использованы для формирования, руководства и мониторинга усилий подрядчика по проектированию. В статье «Оценка способности проекта соответствовать системным требованиям» приводятся рекомендации по установлению и обеспечению прослеживаемости, важность двусторонней прослеживаемости (как вверх, так и вниз), необходимость иметь в виду тестирование при начале усилий по отслеживанию и ценность привлечения с оперативным пользователем.В нем описывается метод использования матрицы прослеживаемости требований для управления конкретной прослеживаемостью и верификацией от потребностей пользователя до требований к проектированию и модулям разработки до тестовых примеров и мер / метрик для успеха.

Для получения дополнительной информации см. Разделы SEG «Разработка концепции», «Разработка требований» и «Системная архитектура».

Ссылки и ресурсы

• Blanchard, B. S. и W. J. Fabrycky, 2010, Системная инженерия и анализ (5 ^th Ed.), Нью-Джерси: Прентис-Холл.

Границы | Дизайн, разработка и оптимизация функциональной платформы для бесклеточного синтеза белков млекопитающих

Введение

Бесклеточный синтез белка (CFPS) — развивающаяся область исследований. Первоначально разработанный для расшифровки генетического кода (Nirenberg and Matthaei, 1961), CFPS недавно стал мощным инструментом, открывающим новые возможности для экспрессии белков, метаболической инженерии, терапевтического развития, образования и многого другого (Gregorio et al., 2019). CFPS имеет несколько преимуществ по сравнению с традиционной экспрессией на клеточной основе, включая открытую реакционную среду, которая позволяет добавлять энхансеры и неприродные соединения для облегчения экспрессии белка, отсутствие необходимости поддерживать клетки в живом состоянии и способность направлять всю энергию и клеточный аппарат для трансляции мРНК, кодирующей интересующий белок.

Среди платформ CFPS эукариотические системы вызывают все больший интерес из-за их способности продуцировать посттрансляционно модифицированные белки (Mikami et al., 2006a; Brödel et al., 2013; Zemella et al., 2018). Системы были разработаны на основе дрожжей (Hodgman, Jewett, 2013; Gan and Jewett, 2014; Aw and Polizzi, 2019; Zhang et al. , 2020), растений (Madin et al., 2000; Murota et al., 2011; Buntru et al., 2014, 2015), насекомых (Ezure et al., 2006, 2010; Madono et al., 2011; Richter et al., 2014; Stech et al., 2014) и клетки млекопитающих (Stavnezer, Huang , 1971; Шилдс и Блобель, 1978; Джексон и Хант, 1983; Старр и Хановер, 1990; Катцен, Кудлики, 2006; Миками и др., 2006а, б; Миками и др., 2008; Brödel et al., 2014; Ядавалли и Сэм-Йеллоу, 2015; Thoring et al., 2017; Бургенсон и др., 2018; Торинг и Кубик, 2018). Системы млекопитающих представляют особый интерес из-за их способности продуцировать гликопротеины с N-связанным гликозилированием, подобным человеческому. Это привело к разработке платформ CFPS для клеток человека (Mikami et al., 2008; Yadavalli and Sam-Yellowe, 2015; Burgenson et al., 2018) и клеток яичника китайского хомячка (CHO) (Brödel et al., 2014, 2015; Мартин и др., 2017; Thoring et al., 2017; Thoring and Kubick, 2018) и др. Среди предыдущих работ, демонстрирующих CFPS с использованием CHO, только одна группа сообщила об успешной разработке надежной платформы CFPS на данный момент (Brödel et al. , 2014, 2015; Thoring et al., 2017; Thoring and Kubick, 2018), в то время как другие полагались на использование коммерческого набора «1-этапный CHO High Yield In vitro Translation (IVT)» (Thermo Scientific, West Palm Beach, FL, в настоящее время прекращено) (Martin et al., 2017). Хотя стоимость коммерческих наборов высока, они упрощают рабочий процесс экспрессии белка и предлагают стандартизированные реагенты для воспроизводимых характеристик CFPS.Однако, поскольку детали продукта коммерческих наборов не раскрываются, а реагенты предоставляются в виде предварительно смешанных исходных материалов, они имеют ограниченную гибкость для настройки реакции для различных целей.

Поэтому большой интерес представляет углубление понимания платформ CFPS млекопитающих и содействие разработке собственных систем с улучшенным выходом белка. В этой методической статье мы делимся своими научными открытиями и техническими протоколами с сообществом, не имеющим клеток.В частности, мы разработали CFPS на основе адаптированных к суспензии клеток СНО, который включает добавление двух дополнительных белков для увеличения выхода белка. Мы изучили три варианта реализации этих дополнительных белков и показали повышенную экспрессию tGFP во всех случаях.

Периодические реакции хорошо подходят для высокопроизводительного скрининга, поскольку их можно легко и быстро подготовить. Выходы платформ CFPS варьируются от 1 мкг / мл до 2,3 мг / мл в периодическом режиме в зависимости от сложности белков (Kobs, 2008; Caschera and Noireaux, 2014).В системах CFPS на основе клеток СНО общий выход белка 9–51,3 мкг / мл был достигнут в периодическом режиме (Brödel et al., 2014; Stech et al., 2017). Наша бесклеточная система генерирует выход до 20 мкг / мл tGFP с добавлением дополнительных белков, что соответствует ранее сообщенным выходам от CFPS млекопитающих на основе клеток CHO. Этот технический протокол должен позволить новичкам успешно разработать свою собственную систему CHO CFPS с результатами, сопоставимыми с нашими отчетными данными.

Материалы и методы

Культура клеток СНО и получение лизата

Лизат клеток СНО получали из клеток FreeStyle ™ CHO-S (Invitrogen, Великобритания), культивированных в колбах Эрленмейера (Corning, Нидерланды), с использованием среды Gibco ™ 1X CD CHO без компонентов животного происхождения с определенным химическим составом, не содержащей компонентов животного происхождения (Invitrogen, Великобритания), с добавлением 8 мМ L-глутамин (Thermofisher Scientific, Великобритания) и 10 мл / л добавки 100X гипоксантин / тимидин (Thermofisher Scientific, Великобритания). Клетки оживляли размораживанием на водяной бане при 37 ° C с последующим центрифугированием для удаления замораживающей среды и ресуспендированием в 10 мл полной ростовой среды. Культуры засевали с начальной плотностью 3 × 10 ⁵ клеток / мл в 125 мл вентилируемые колбы Эрленмейера и пересевали каждые 3-4 дня в полную питательную среду при плотности посева 2 × 10 ⁵ клеток / мл. Клетки субкультивировали не менее двух раз перед использованием для приготовления экстракта. Культуры поддерживали в увлажненном инкубаторе на орбитальной встряхиваемой платформе, вращающейся со скоростью 125 об / мин при 37 ° C и 5% CO ₂ .Приблизительно 200–250 мл клеток CHO-S с плотностью ~ 4 × 10 ⁶ клеток / мл требовалось для приготовления нескольких мл лизата, а для активных лизатов требовалась жизнеспособность культуры> 90%.

За исключением исследований содержания энергии, клетки CHO собирали из периодической культуры в середине логарифмической фазы (день 4). Клетки собирали центрифугированием в течение 5 минут при 200 × g при 4 ° C и дважды промывали ледяным 25 мл буфера на основе HEPES (40 мМ HEPES-KOH (pH 7,5), 100 мМ NaOAc и 4 мМ DTT, 1 / на 50 мл полной таблетки ингибитора протеазы, не содержащей ЭДТА).Для предотвращения разложения во время приготовления лизата суспензию клеток осторожно перемешивали и осадки повторно суспендировали пипетированием. Для каждой стадии промывки клетки центрифугировали в течение 5 минут при 200 × g при 4 ° C, за исключением последней промывки, когда клетки центрифугировали в течение 10-15 минут, чтобы гарантировать, что они были полностью осаждены перед окончательной ресуспендированием.

Лизаты были приготовлены в холодной комнате, и время обработки было сведено к минимуму, чтобы предотвратить потерю активности. Осадок ресуспендировали в буфере на основе HEPES до конечной плотности клеток ~ 4.0 × 10 ⁸ клеток / мл, перенесенных в предварительно охлажденные 3 или 5 мл стеклянные флаконы с защелкивающимися крышками и закрытые прозрачной пластиковой крышкой. В крышке были проделаны два отверстия: одно для вставки иглы, а второе для предотвращения образования вакуума. Клетки подвергали механическому лизированию путем вытягивания и проталкивания клеточной суспензии через иглы BD Precisionglide® 23, 25, 27, L 1 1/4 дюйма с использованием стерильных одноразовых шприцев BD Plastipak ™ на 2 мл. Процедуру лизиса начинали с иглы самого большого размера (калибр 23), и когда сопротивление суспензии клеток заметно снижалось, использовали иглы меньшего размера для увеличения сил сдвига и разрушения оставшихся клеток.Прогресс лизиса наблюдали с помощью светового микроскопа и считали завершенным, когда лизировалось более 90% клеток.

Неочищенный лизат переносили в пробирки Эппендорфа на 1,5 мл и центрифугировали при 10 000 × g, 4 ° C в течение 10 мин для удаления ядер и клеточного дебриса. Супернатант переносили в свежие 1,5 мл пробирки Эппендорфа. Для разложения остаточной ДНК супернатант обрабатывали нуклеазой микрококка при комнатной температуре. Добавляли 100 мМ CaCl ₂ до конечной концентрации 1 мМ, затем 10 ед / мл нуклеазы S7 (M0247S, NEB UK) и лизат инкубировали в течение 2 минут при комнатной температуре.Реакцию останавливали добавлением EGTA до конечной концентрации 6,7 мМ. Наконец, лизат подвергали быстрой заморозке в аликвотах по 200 мкл с использованием жидкого азота, чтобы избежать повторных циклов замораживания-оттаивания, и хранили при -80 ° C.

Количественное определение ATP и GTP

Содержание нуклеотидов определяли с помощью высокоэффективной ионообменной хроматографии (HPAEC), как ранее сообщалось del Val et al. (2013). Вкратце, клетки СНО собирали, промывали и гасили, используя ледяной 0,9% -ный водный раствор NaCl.Один объем образца клеточной культуры (1,5 × 10 ⁷ клеток) добавляли к четырем объемам гасящего раствора. Смесь центрифугировали (1000 g, 1 мин, 4 ° C) и осадок клеток ресуспендировали во втором объеме гасящего раствора (ледяной 0,9% мас. / Об. NaCl). Эту суспензию снова центрифугировали (1000 g, 1 мин), чтобы получить осадок клеток для экстракции ацетонитрилом. Для выделения внутриклеточных нуклеотидов осадок клеток затем ресуспендировали в 3 мл ледяного 50% об. / Об. Водного раствора ацетонитрила.2 мкл 20 мМ GDP-Glc добавляли в качестве внутреннего стандарта и полученную суспензию инкубировали на льду в течение 10 минут. Образец центрифугировали (0 ° C, 18000 g, 5 мин), супернатант собирали и сушили при комнатной температуре с помощью SpeedVac (Savant, США). Высушенный экстракт ресуспендировали в 240 мкл деионизированной воды и хранили при -80 ° C до анализа. Образец размораживали при комнатной температуре и фильтровали с использованием стерильных фильтрованных шприцевых фильтров Sartorius ™ Minisart ™ Plus 0,2 мкм перед анализом с помощью HPAEC с использованием системы Alliance HPLC (Waters), оснащенной колонкой CarboPac PA-1 и защитной колонкой PA-1 ( Дионекс, США).GTP и ATP для ВЭЖХ использовали для создания стандартной кривой для количественной оценки внутриклеточного содержания GTP и ATP в клетках.

Реакции внеклеточного синтеза белка

Реакционная смесь содержит большое количество реагентов, и ее активность сильно зависит от скорости и метода приготовления. Из-за своего сложного состава приготовление смеси очень подвержено ошибкам при пипетировании и деградации реагентов. Следовательно, чтобы получить сопоставимые данные для оценки эффекта препарата для лизиса и дополнительных белков, мы использовали коммерческую реакционную смесь.Реакции проводили с использованием оптимизированного протокола «1-Step Human Coupled IVT Kit» (ThermoScientific, West Palm Beach, FL) в качестве руководства.

Все реакции CFPS проводились в сопряженном периодическом режиме в общем реакционном объеме 25 мкл. Реакции состояли из четырех различных предварительно подготовленных компонентов (матричная ДНК, лизат, реакционная смесь и вспомогательные белки). Для каждой 25 мкл реакции добавляли 1 мкг матричной ДНК. Хотя реакционная смесь, основанная на предыдущей работе, первоначально использовалась для реакций CFPS (Aw and Polizzi, 2019), в описанной здесь работе мы использовали реакционную смесь, поставляемую с коммерческим набором, чтобы обеспечить прямое сравнение. Все компоненты разморозили на льду и смешали при комнатной температуре. Лизат инкубировали с дополнительными белками в течение 10 мин, а затем добавляли реакционную смесь и ДНК. Планшеты герметизировали герметизирующей мембраной BreatheEasy (Sigma Aldrich). CFPS проводили в течение ночи при 30 ° C в 384-луночном планшете (Corning) в микротитровальном устройстве Synergy HT (BioTek, Winooski, VT) со встряхиванием при настройке среды. Модельный белок tGFP экспрессировали с использованием вектора положительного контроля (pT7CFE1-tGFP-CHis), включенного в 1-Step Human High-Yield IVT Kit (Thermo Scientific, West Palm Beach, FL).

Количественное определение функционального tGFP

Выходы белка

tGFP определяли количественно измерением флуоресценции с использованием микротитровального ридера Synergy HT (BioTek, Winooski, VT) с длиной волны возбуждения 485 нм и длиной волны излучения 528 нм. Рекомбинантный tGFP от Evrogen (Cambridge Bioscience, UK) использовали для построения стандартной кривой для преобразования единиц флуоресценции в концентрации.

Рекомбинантная экспрессия и очистка дополнительных белков

Экспрессию и очистку K3L, а также полноразмерного и укороченного (Δ1–240) GADD34 проводили, как описано в Mikami et al.с использованием E. coli C41 (DE3) (Люциген, Миддлтон, Висконсин, США) в качестве хозяина для экспрессии (Mikami et al., 2006a, 2010a). Плазмиды pGEX-6P-GADD34-FLAG и pTac-His-K3L были любезным подарком от Хироаки Иматака (Университет Хиого). Укороченная на N-конце форма GADD34 была амплифицирована с помощью ПЦР и клонирована в pGEX-6P-1. После очистки K3L и обе версии GADD34 были впоследствии заменены буфером на 20 мМ HEPES pH 7,0–7,6 (Sigma-Aldrich) и сконцентрированы с использованием центробежных концентраторов Vivaspin 500 с отсечкой по молекулярной массе (MWCO) 3 кДа и 30 кДа. (Сигма-Олдрич, Св.Луи, Миссури) соответственно. Для максимальной активности дополнительных белков стадии очистки и концентрирования проводили в холодной комнате.

Временная экспрессия усеченного GADD34 в клетках СНО

Усеченная последовательность GADD34 (Δ1–240) была клонирована в основную цепь mCherry2-C1 (плазмида Addgene № 54563), любезный подарок Майкла Дэвидсона, в рамке с кодирующей последовательностью mCherry для создания конструкции pmCherry-Trunc-GADD34. pmCherry-Trunc-GADD34 получали с использованием набора Maxi, не содержащего эндотоксинов (Qiagen, UK), в соответствии с инструкциями производителя, и очищенную плазмиду разбавляли до 1 мкг / мкл.

Клетки

FreeStyle ™ CHO-S (Invitrogen, Великобритания) использовали для временной экспрессии GADD34Δ1–240 в виде C-концевого слияния с mCherry. Условия культивирования были такими же, как описано ранее. Клетки оживляли в стерильной встряхиваемой колбе Эрленмейера из поликарбоната объемом 125 мл, содержащей 30 мл предварительно нагретой среды для экспрессии FreeStyle ™ CHO (Thermo Scientific, Великобритания) с добавлением 8 мМ L-глутамина (Sigma-Aldrich, Великобритания). Через 72 часа после возрождения клетки пересевали при начальной плотности посева 0.3 × 10 ⁶ жизнеспособных клеток / мл в предварительно нагретой среде с последующим субкультивированием при 1 × 10 ⁶ жизнеспособных клеток / мл каждые 3 дня. Перед трансфекцией произошло минимум пять пассажей, чтобы обеспечить восстановление клеток. За 48 часов до трансфекции клетки пассировали для получения плотности 4-8 × 10 ⁶ клеток / мл в день трансфекции. Непосредственно перед трансфекцией культуру разбавляли полной средой до конечной плотности 2 × 10 ⁶ клеток / мл в колбе Эрленмейера на 500 мл, содержащей 80 мл культуральной среды.

Был приготовлен комплекс для трансфекции, состоящий из 8 мл среды FreeStyle CHO Expression, 96 мкл плазмидной ДНК, 80 мкл реагента TransIT-PRO (Cambridge Bioscience, Великобритания) и 40 мкл реагента PRO Boost (Cambridge Bioscience, Великобритания). Реагенты TransIT-PRO и PRO Boost инкубировали при комнатной температуре и осторожно встряхивали перед использованием. Плазмидную ДНК разбавляли средой FreeStyle CHO и после осторожного перемешивания последовательно добавляли реагент TransIT-PRO и реагент PRO Boost. Приготовленную смесь для трансфекции инкубировали при комнатной температуре в течение 10 мин, чтобы дать достаточно времени для образования комплексов.После добавления комплекса трансфекции к культуре клеток трансфицированные клетки инкубировали в течение 3 дней в тех же условиях культивирования, которые описаны ранее. Через три дня после трансфекции клетки собирали и готовили лизат, как описано ранее. Для получения активных лизатов требовалась жизнеспособность культуры выше 85%. Лизаты с временно экспрессируемым mCherry-GADD34Δ1–240 хранили и обрабатывали так же, как лизаты без временной экспрессии.

Для расчета количества экспрессированного слитого белка mCherry-GADD34Δ1–240 5 × 10 клеток ⁶ дважды промывали холодным PBS и осаждали центрифугированием при 2500 × g в течение 5 мин.К осадку клеток добавляли 1 мл буфера RIPA (Thermofisher Scientific, Великобритания). Повторно суспендированный осадок инкубировали на льду при осторожном встряхивании в течение 15 мин. Смесь центрифугировали при ~ 14000 × g в течение 15 мин для осаждения клеточного дебриса и супернатант использовали для проведения измерений флуоресценции. Стандартная кривая mCherry была построена с использованием белка mCherry (Biovision, mCherry Quantification Kit), серийно разведенного в буфере RIPA в диапазоне от 50 нг до 0,8 мкг. Количество экспрессированного слияния mCherry-GADD34Δ1–240 в лизате рассчитывали как 0.18 мкг / мкл.

Статистический анализ

Данные были проанализированы с помощью одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим тестом Стьюдента t с использованием двустороннего распределения. Значение p <0,05 обозначается ^* , p <0,01 - ^** , p <0,001 - ^*** .

Результаты

Создание функциональных лизатов клеток СНО

Наша первоначальная цель заключалась в разработке функциональных лизатов клеток CHO, которые включали культивирование и определение характеристик клеток CHO, определение оптимального времени сбора клеток и идентификацию успешного метода лизирования клеток при сохранении активности внутриклеточного аппарата.Первоначально мы оценили характеристики роста двух родительских клеточных линий CHO, CHO-S и CHO-K1. CHO-K1 использовался в предыдущей работе (Stech et al., 2013), но эта клеточная линия подвержена слипанию, даже если она адаптирована к суспензии, что затрудняет эффективный лизис (дополнительный рисунок 1). Более того, клетки CHO-S быстрее восстанавливаются после криоконсервации и имеют более высокую скорость роста, что приводит к увеличению плотности клеток в 1,5 раза на 5-й день культивирования, что увеличивает скорость приготовления лизата.Поэтому для всей дальнейшей работы мы выбрали CHO-S.

Характеристика клеточной культуры является важной предпосылкой для поиска наилучших условий сбора для получения активного лизата. Сбор клеток в нужное время может привести к повышению урожайности CFPS и повышению экономической эффективности. Поэтому сначала мы оценили влияние дня сбора урожая на активность полученного лизата. Мы предположили, что содержание нуклеотидтрифосфата в точке сбора может влиять на трансляционную активность, влияя на количество доступной энергии для реакции, а также на состояние фосфорилирования трансляционного аппарата (Jewett et al., 2009). Клетки собирали на 3, 4 и 5 дни, соответствующие ранней, средней и поздней экспоненциальной фазе, соответственно, и содержание АТФ и ГТФ измеряли с помощью анионообменной хроматографии. В целом, содержание АТФ было более изменчивым, чем содержание ГТФ, и достигло пика на 4-й день (рис. 1А). С другой стороны, хотя содержание GTP было статистически ниже на 3-й день, чем на 4-й или 5-й день, статистически значимой разницы между содержанием GTP на 4-й и 5-й день не наблюдалось ( p = 0.37). На основании оцененных результатов, 4-й день оказался оптимальным днем ​​сбора урожая с точки зрения содержания энергии.

Рисунок 1 . Определение оптимальных сроков сбора урожая. (A) Содержание внутриклеточного АТФ и ГТФ (в фмоль / клетку) на 3, 4 и 5 дни (ранняя, средняя и поздняя логарифмическая фаза, соответственно) культивирования. Планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение среднего значения трех образцов, взятых из независимых культуральных колб. (B) Экспрессия GFP с использованием лизатов, собранных и подготовленных в три дня сбора урожая.Плазмиду положительного контроля, вспомогательные белки и реакционные смеси из одностадийного набора для IVT Human Coupled использовали для облегчения сравнения. Планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение среднего трех независимых реакций CFPS (* p <0,05). Ранняя логарифмическая фаза: день 3, средняя логарифмическая фаза: день 4, поздняя логарифмическая фаза: день 5. Измерения корректировали на отрицательный контроль (NC, без добавления плазмиды).

Затем мы сравнили выходы модельного белка tGFP из CFPS с использованием лизатов, приготовленных из клеток, собранных на 3, 4 и 5 дни (рис. 1B).Мы наблюдали самую высокую экспрессию tGFP в реакциях с использованием лизатов из клеток, собранных на 4-й день, затем на 3-й и затем на 5-й день. Результаты показывают, что 4-й день является оптимальным временем сбора для получения лизатов с максимальной активностью. Хотя причина этого наблюдения требует дальнейшего изучения, содержание АТФ может быть индикатором общего состояния клетки. Например, доступность АТФ может коррелировать с состоянием фосфорилирования факторов инициации трансляции или уровнем экспрессии метаболических ферментов. Это контрастирует с предыдущей работой, в которой сообщалось о самой высокой активности экстрактов из клеток, собранных на поздней логарифмической фазе (Brödel et al., 2015). Однако использовали разные клеточные линии (CHO-S против CHO-K1), и режим культивирования также был различным (встряхиваемые колбы против биореакторов), предполагая, что оптимальное время сбора может варьироваться в зависимости от клеточной линии и условий культивирования. Следовательно, важно охарактеризовать выбранную клеточную линию, чтобы найти оптимальное время сбора урожая для каждого условия роста.

После того, как был найден оптимальный день сбора урожая, мы сравнили ряд методов лизиса, чтобы определить лучший метод получения активных лизатов. Идеальный метод клеточного лизиса уравновешивает эффективное разрушение клеточной мембраны с сохранением активности клеточного аппарата. Мы начали с протокола, ранее опубликованного Brödel et al. (2014, 2015), который рекомендует использовать иглы № 20 в качестве отправной точки. Однако эффективность лизиса была ниже ожидаемой (дополнительный рисунок 2).Поэтому были изучены различные методы лизиса (обработка ультразвуком, гомогенизация, кавитация азота, циклы замораживания-оттаивания и иглы). Среди различных подходов только «игольчатый метод» оказался успешным в эффективном лизировании клеток (рис. 2). Однако требовались иглы гораздо меньшего размера (23, 25 и 27, используемые последовательно), возможно, из-за меньшего размера клеток CHO-S по сравнению с клетками CHO-K1. Более жесткие методы, такие как обработка ультразвуком или гомогенизация, которые традиционно используются для приготовления экстракта микробных клеток, не оказались успешными.В этих случаях клетки были эффективно лизированы, но экстракт не функционировал (см. Дополнительную таблицу 1). Мы представляем детали нашего рабочего процесса подготовки лизата на Рисунке 2.

Рисунок 2 . Рабочий процесс приготовления лизата. Создано с помощью Biorender (biorender.com).

Добавление в реакции очищенного GADD34 и / или K3L приводит к увеличению выхода экспрессии

Создав активные лизаты, мы сосредоточились на разработке собственных рабочих процессов для подготовки и добавления дополнительных белков для увеличения выхода CFPS. Одним из узких мест в CFPS эукариот является фосфорилирование эукариотического фактора инициации трансляции 2 (eIF2), которое со временем ведет к снижению инициации трансляции (Zeenko et al., 2008). Чтобы противодействовать этому, реакции могут быть дополнены двумя вспомогательными белками, GADD34 и K3L, которые, как было показано, увеличивают активность систем CFPS, полученных из клеток человека, но ранее не тестировались в CHO CFPS (Mikami et al., 2006a, 2010b; Бургенсон и др., 2018). GADD34 является регулятором, который задействует протеинфосфатазу 1, что приводит к дефосфорилированию eIF2α (Novoa et al., 2001), а K3L — вирусный белок, который действует как псевдосубстрат, снижая фосфорилирование eIF2α (Carroll et al., 1993).

В первой итерации мы протестировали добавление различных концентраций полноразмерных GADD34 и K3L в нашу систему. Оба белка рекомбинантно экспрессировались в клетках E.coli , а затем очищались перед добавлением (Hinnebusch, 2000). Активный tGFP продуцировался в реакциях CFPS без добавления дополнительного белка, но выходы были низкими и широко варьировались от реакции к реакции (средние выходы ~ 0. 4 мкг / мл, диапазон 0,05–1,08 мкг / мл). Добавление к CFPS либо одного дополнительного белка, либо в комбинации приводило к увеличению выхода tGFP по сравнению с контролем без добавок (рис. 3). Увеличение концентрации дополнительных белков привело к дальнейшему увеличению выхода, предположительно из-за большей степени дефосфорилирования трансляционного аппарата, ведущего к усиленной инициации трансляции. Тестируемые здесь концентрации были недостаточно высокими для достижения плато в экспрессии tGFP.Однако они не могли быть дополнительно увеличены из-за низкого выхода экспрессии дополнительных белков, что ограничивало количество белка, доступного для тестирования. При добавлении как GADD34, так и K3L наблюдался сильный синергетический эффект, который приводил к ~ 50-кратному увеличению уровней экспрессии tGFP по сравнению с выходами tGFP, достигнутыми без добавления дополнительных белков. Синергизм, скорее всего, связан с разными ролями, которые K3L и GADD34 играют в снижении инактивации EIF2α. Интересно, что эти результаты отличаются от результатов, полученных для экстрактов HeLa, где не было отмечено синергизма (Mikami et al., 2006а). Наши результаты также показывают, что эффект добавления только GADD34 оказывает большее влияние (~ 10-кратное увеличение выхода), чем добавление только K3L (~ 6-кратное увеличение). Это может быть связано с активной ролью GADD34 в рекрутировании фосфатазы для дефосфорилирования механизма инициации трансляции по сравнению с более пассивной ролью K3L как псевдосубстрата. При добавлении обоих вспомогательных белков выход tGFP приближался к 20 мкг / мл.

Рисунок 3 .Добавление дополнительных белков GADD34 и K3L приводит к значительному увеличению выхода экспрессии по сравнению с выходом, достигаемым в их отсутствие. GADD34 и K3L были отдельно и добавлены в комбинации в различных концентрациях к реакциям CFPS. Отсутствие AP относится к выходу реакции CFPS в отсутствие дополнительных белков, что соответствует среднему выходу ~ 0,4 мкг / мл (диапазон 0,05–1,08 мкг / мл). Выходы приведены к отдельным реакциям без одновременного проведения дополнительных белков.Планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение среднего значения трех независимых реакций CFPS с использованием одного и того же лизата (** p <0,01, *** p <0,001).

Усечение GADD34 улучшает его восстановление без ущерба для его эффекта

Полноразмерный GADD34 было трудно экспрессировать и очистить в количествах, которые требовались для добавления CFPS. Однако предыдущая работа показала, что усечение мембранного домена GADD34 приводит к улучшенной экспрессии в E.coli без потери активности (Mikami et al., 2010a). Поэтому мы экспрессировали усеченную версию GADD34 (GADD34Δ1–240) и повторили эксперименты с добавками. В целом, E. coli , экспрессирующая GADD34Δ1–240, росла до более высокой оптической плотности во время экспрессии, что свидетельствует о снижении нагрузки экспрессии, с ~ 1,4-кратным увеличением оптической плотности (OD) при сборе урожая (GADD34: 2. 11, усеченный GADD34: 2.96, дополнительный рисунок 3). В результате количество GADD34Δ1–240, полученного после очистки, увеличивалось в 4 раза.

В реакции CHO CFPS добавление GADD Δ1–240 имело такой же эффект на выход белка, как и полноразмерная форма, с увеличением выхода в 114 раз при самой высокой добавленной концентрации (рис. 4). Чтобы оценить, нарушает ли усечение функцию, GADD Δ1–240 был протестирован в тех же концентрациях, что и полноразмерная версия. Однако из-за вариаций в контрольной реакции без дополнительного белка общие выходы были ниже ~ 14 мкг / мл. Кроме того, в отличие от результатов с полноразмерным GADD34, не было синергетического эффекта, когда к реакциям добавлялись как GADD34Δ1–240, так и K3L.

Рисунок 4 . Усечение не влияет на эффект урожайности GADD34 на урожайность CFPS. Отрицательный контроль относится к выходу реакции CFPS в отсутствие дополнительных белков, что соответствует среднему выходу 0,13 мкг / мл. Планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение среднего трех независимых реакций CFPS.

Причина снижения эффекта совместного добавления GADD Δ1–240 и K3L до конца не изучена. Однако это может быть связано с более низким уровнем чистоты исходного белка GADD34Δ1–240, продуцируемого в E.coli (дополнительный рисунок 4). Для усеченной версии наблюдалось больше примесей, чем для неусеченной версии, что, вероятно, привело к завышенной оценке исходной концентрации усеченного GADD34. Ранее было замечено, что делеция N-концевой области улучшает стабильность усеченного белка, но увеличивает количество совместно очищенных бактериальных белков (Mikami et al., 2010a).

Временная экспрессия усеченного на N-конце GADD34 в клетках CHO-S увеличивает выход CFPS

Экспрессия и очистка дополнительных белков требует дополнительных этапов обработки.Таким образом, мы затем исследовали потенциал временной экспрессии вспомогательных белков в клетках СНО до генерации лизата в качестве альтернативного метода, который может сократить время обработки и ресурсы. GADD34 показал большее влияние на выход экспрессии, чем K3L и GADD34Δ1–240, экспрессирующиеся на более высоких уровнях. Поэтому мы сосредоточились на временной экспрессии GADD34Δ1–240. Ген GADD34Δ1–240 был клонирован в плазмиду mCherry2-C1 в рамке считывания с N-концевой меткой mCherry для получения флуоресцентного слитого белка, который было легко обнаружить.Клетки собирали через 3 дня после временной трансфекции, и концентрация слитого белка mCherry-GADD34Δ1–240 в лизате, по оценкам, составляла ~ 0,18 мкг / мкл (дополнительный рисунок 5). Использование этого лизата в реакции CFPS приводит к конечной концентрации mCherry-GADD34Δ1–240 0,086 мкг / мкл, что сопоставимо со средней концентрацией, добавленной в экспериментах с добавками (0,06 мкг / мкл). В целом, экспрессия GADD34Δ1–240 в клетках до генерации лизата приводила к 47,5-кратному увеличению экспрессии tGFP по сравнению с отрицательным контролем, в котором GADD34 не экспрессировался (фиг. 5).Однако общая экспрессия tGFP была ниже в лизатах, полученных из клеток, временно экспрессирующих GADD34Δ1–240, по сравнению с теми, в которые добавлялся очищенный GADD34Δ1–240 (3,5 против 4,8 мкг / мл, соответственно). Мы полагаем, что это, вероятно, связано с негативным влиянием временных условий трансфекции на энергетическое состояние клетки, хотя мы не можем исключить, что слияние mCherry приводит к снижению активности GADD34. Клеточный экстракт от временной трансфекции собирали на 3-й день из-за более низкой жизнеспособности, и хорошо известно, что полиэтиленимин, используемый для временной трансфекции, снижает жизнеспособность культуры, а также может снижать уровень активности белкового аппарата для CFPS.Негативный эффект PEI ограничивает применение этого подхода, хотя стабильная экспрессия вспомогательных белков в экстрактах CHO еще предстоит изучить в будущем. Кроме того, может быть полезно протестировать другие методы временной трансфекции, которые могут иметь меньшее влияние на физиологию клеток.

Рисунок 5 . Эффект временной экспрессии усеченного на N-конце GADD34 в клетках СНО перед приготовлением лизата. Во всех случаях отрицательный контроль относится к выходу реакции CFPS в отсутствие дополнительных белков, что соответствует среднему выходу ~ 0. 07 мкг / мл. Планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение среднего трех независимых реакций CFPS.

Обсуждение

CFPS млекопитающих — полезные инструменты для высокопроизводительного скрининга и производства белков, требующих посттрансляционных модификаций. В этой статье мы поделились нашими подробными протоколами для проектирования, разработки и оптимизации функциональной платформы для бесклеточного синтеза белка млекопитающих, полученной из культивируемых клеток CHO. Среди ингредиентов, необходимых для реакции CFPS, лизат клеток является наиболее трудоемким компонентом для приготовления, требующим осторожного обращения для защиты функциональности механизма синтеза белка.Кроме того, поскольку производительность платформ CFPS сильно зависит от инициации трансляции, важно улучшить этот шаг для разработки надежных бесклеточных платформ. Таким образом, целью данного исследования было найти оптимальный метод приготовления активного клеточного лизата и увеличить выход синтеза белка за счет добавления дополнительных белков для борьбы с фосфорилированием машины трансляции. Были продемонстрированы три варианта увеличения экспрессии белков путем дополнения реакций дополнительными белками, которые уменьшают фосфорилирование трансляционного аппарата.В общем, существует компромисс между эффектом доходности выражений и простотой реализации. Экспрессия вспомогательных белков в гетерологичном хозяине и последующее добавление их в реакцию привело к более высоким выходам tGFP в целом, но это более громоздкий протокол, требующий дополнительных шагов для очистки и концентрирования вспомогательных белков. С другой стороны, временная экспрессия GADD34Δ1–240 все еще увеличивает экспрессию tGFP, хотя и в меньшей степени из-за снижения жизнеспособности клеток, и это намного проще.В будущем создание стабильных клеточных линий, экспрессирующих дополнительные белки, может обеспечить путь для легкого получения лизатов с повышенной активностью. Объясняя наши методы, включая все детали разработанных протоколов, мы надеемся улучшить понимание узких мест в системах CHO CFPS. Мы стремимся стимулировать более широкое участие в CFPS млекопитающих как в бесклеточном сообществе, так и в биотехнологической обработке, и надеемся предложить мощную и более гибкую альтернативу использованию доступных коммерческих наборов. Мы считаем, что необходим совместный подход, чтобы сделать CFPS млекопитающих более широко используемым исследовательским инструментом и установить CHO CFPS в качестве платформы для быстрого производства и скрининга для терапевтических разработок.

Заявление о доступности данных

Оригинальные материалы, представленные в исследовании, включены в статью / дополнительные материалы, дальнейшие запросы можно направлять соответствующим авторам.

Авторские взносы

CH: концептуализация, методология, исследование, курирование данных, написание — подготовка оригинального проекта, визуализация.ГБ: расследование, написание – рецензирование и редактирование. IM-R: расследование, курирование данных, написание – рецензирование и редактирование. OC: написание – рецензирование и редактирование. СК и КП: концептуализация, супервизия, написание – рецензирование и редактирование. Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.

Финансирование

CH был профинансирован Фондом Марит Мон Вестлейк. GB и IM-R финансировались Исследовательским советом по инженерным и физическим наукам Великобритании (EP / K038648 / 1, EP / R511547 / 1).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Мы хотели бы поблагодарить EPSRC Impact Acceleration Account (EP / R511547 / 1) за финансирование. Мы благодарим профессора Хироаки Иматака за то, что он поделился своими конструкциями экспрессии K3L, GADD34 и усеченного GADD34, и Майкла Дэвидсона за создание плазмиды mCherry2-C1. Мы также благодарим доктора Рошель Ав за то, что она поделилась своими экспертными знаниями в области эукариотических систем CFPS.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https: // www.frontiersin.org/articles/10.3389/fbioe.2020.604091/full#supplementary-material

Список литературы

Ав, Р. , и Полицци, К. М. (2019). Конструирование с помощью биосенсоров высокопроизводительной платформы для бесклеточного синтеза белка Pichia pastoris. Biotechnol. Bioeng . 116, 656–666. DOI: 10.1002 / бит. 26901

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Brödel, A.K., Sonnabend, A., Roberts, L.O., Stech, M., Wüstenhagen, D.A., and Kubick, S.(2013). IRES-опосредованная трансляция мембранных белков и гликопротеинов в бесклеточных системах эукариот. PLoS ONE 8: e82234. DOI: 10.1371 / journal.pone.0082234

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бредель, А. К., Вустенхаген, Д. А., и Кубик, С. (2015). Системы бесклеточного синтеза белка, полученные из культивируемых клеток млекопитающих. Methods Mol. Биол . 1261, 129–140. DOI: 10.1007 / 978-1-4939-2230-7_7

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бунтру, М., Фогель, С., Шпигель, Х., Шилберг, С. (2014). Бесклеточный лизат табака BY-2: альтернативная и высокопродуктивная система трансляции in vitro на растительной основе. БМК Биотехнология . 14:37. DOI: 10.1186 / 1472-6750-14-37

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бунтру М., Фогель С., Стофф К., Шпигель Х. и Шилберг С. (2015). Универсальная связанная бесклеточная система транскрипции-трансляции на основе клеточных лизатов табака BY-2. Biotechnol.Bioeng . 112, 867–878. DOI: 10.1002 / бит.25502

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бургенсон Д., Гуррамконда К., Пилли М., Ге, X. Д., Андер А., Костов Ю. и др. (2018). Быстрая экспрессия рекомбинантного белка в бесклеточных экстрактах крови человека. Sci. Репутация . 8: 7. DOI: 10.1038 / s41598-018-27846-8

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кэрролл, К., Элрой-Стейн, О., Мосс, Б., и Ягус, Р.(1993). Продукт гена рекомбинантного вируса осповакцины K3L предотвращает активацию двухцепочечной РНК-зависимой, специфической для фактора инициации 2 альфа протеинкиназы. J. Biol. Chem . 268, 12837–12842. DOI: 10.1016 / S0021-9258 (18) 31463-7

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Caschera, F., and Noireaux, V. (2014). Синтез 2,3 мг / мл белка с помощью бесклеточной системы транскрипции-трансляции Escherichia coli. Biochimie 99, 162–168.DOI: 10.1016 / j.biochi.2013.11.025

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

дель Валь, И. Дж., Кириакопулос, С., Полицци, К. М., и Конторавди, К. (2013). Оптимизированный метод экстракции и количественного определения нуклеотидов и нуклеотидных сахаров из клеток млекопитающих. Анал. Биохим . 443, 172–180. DOI: 10.1016 / j.ab.2013.09.005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Эзуре, Т., Судзуки, Т., Хигашиде, С., Shintani, E., Endo, K., Kobayashi, S.-, i, et al. (2006). Система бесклеточного синтеза белка, полученная из клеток насекомых путем замораживания-оттаивания. Biotechnol. Прог . 22, 1570–1577. DOI: 10.1021 / bp060110v

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Эзуре, Т., Судзуки, Т., Шиката, М., Ито, М., Андо, Э., Утсуми, Т. и др. (2010). Разработка бесклеточной системы насекомых. Curr. Pharm. Биотехнология . 11, 279–284. DOI: 10.2174 / 138920110791111997

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ган, Р., и Джуэтт, М.С. (2014). Комбинированная бесклеточная система транскрипции-трансляции от Saccharomyces cerevisiae для быстрого и надежного синтеза белка. Biotechnol. Дж . 9, 641–651. DOI: 10.1002 / biot.201300545

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хиннебуш А.Г. (2000). 5 механизм и регуляция связывания инициатора метионил-тРНК с рибосомами. Монография Колд-Спринг-Харбор Arch . 39, 185–243. DOI: 10.1101 / 0.185-243

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ходжман, К.Э., и Джуэтт, М. С. (2013). Оптимизированные методы приготовления экстракта и условия реакции для улучшения бесклеточного синтеза белка дрожжей. Biotechnol. Bioeng . 110, 2643–2654. DOI: 10.1002 / бит 24942

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джексон, Р. Дж., И Хант, Т. (1983). Приготовление и использование обработанных нуклеазой лизатов ретикулоцитов кролика для трансляции эукариотической матричной РНК. Meth. Энзимол . 96, 50–74. DOI: 10.1016 / S0076-6879 (83) 96008-1

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джуэтт, М. К., Миллер, М. Л., Чен, Ю. и Шварц, Дж. Р. (2009). Продолжающийся синтез белка при низком уровне [АТФ] и [ГТФ] позволяет клеткам адаптироваться при ограничении энергии. Дж. Бактериол . 191, 1083–1091. DOI: 10.1128 / JB.00852-08

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Катцен, Ф., и Кудлики, В. (2006). Эффективное создание бесклеточных трансляционных экстрактов насекомых, активных в гликозилировании и обработке сигнальных последовательностей. Дж. Биотехнология . 125, 194–197. DOI: 10.1016 / j.jbiotec.2006.03.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мадин К., Савасаки Т., Огасавара Т. и Эндо Ю. (2000). Высокоэффективная и надежная система бесклеточного синтеза белка, полученная из зародышей пшеницы: растения, по-видимому, содержат систему самоубийства, направленную на рибосомы. Proc. Natl. Акад. Sci. США . 97, 559–564. DOI: 10.1073 / pnas.97.2.559

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мадоно, М., Савасаки, Т., Моришита, Р., Эндо, Ю. (2011). Бесклеточная система производства белка зародышей пшеницы для постгеномных исследований. Н. Биотехнология . 28, 211–217. DOI: 10.1016 / j.nbt.2010.08.009

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Martin, R. W., Majewska, N. I., Chen, C. X., Albanetti, T. E., Jimenez, R. B. C., Schmelzer, A. E., et al. (2017). Разработка бесклеточной платформы на основе СНО для синтеза активных моноклональных антител. ACS Synth.Биол . 6, 1370–1379. DOI: 10.1021 / acssynbio.7b00001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Миками, С., Кобаяси, Т., Иматака, Х. (2010b). «Системы бесклеточного синтеза белка с экстрактами из культивируемых клеток человека» в Внеклеточное производство белка: методы и протоколы . редакторы Y Endo, K. Takai, T. Ueda (Totowa, NJ: Humana Press), 43–52. DOI: 10.1007 / 978-1-60327-331-2_5

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Миками, С., Кобаяси, Т., Мачида, К., Масутани, М., Йокояма, С., Иматака, Х. (2010a). Усеченные на N-конце белки GADD34 являются удобными усилителями трансляции в системе синтеза белка in vitro , происходящей из клеток человека. Biotechnol. Lett . 32, 897–902. DOI: 10.1007 / s10529-010-0251-7

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Миками С., Кобаяси Т., Масутани М., Йокояма С. и Иматака Х. (2008). Полученная из клеток человека , сопряженная с in vitro система транскрипции / трансляции, оптимизированная для продукции рекомбинантных белков. Protein Expr. Purif . 62, 190–198. DOI: 10.1016 / j.pep.2008.09.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Миками, С., Кобаяси, Т., Ёкояма, С., Иматака, Х. (2006a). Система трансляции in vitro на основе гибридомы, которая эффективно синтезирует гликопротеины. Дж. Биотехнология . 127, 65–78. DOI: 10.1016 / j.jbiotec.2006.06.018

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Миками, С., Масутани, М., Соненберг, Н., Йокояма, С., и Иматака, Х. (2006b). Эффективная система бесклеточной трансляции млекопитающих, дополненная факторами трансляции. Protein Expr. Purif . 46, 348–357. DOI: 10.1016 / j.pep.2005.09.021

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мурота, К., Хагивара-Комода, Ю., Комода, К., Оноучи, Х., Исикава, М., и Наито, С. (2011). Бесклеточный экстракт арабидопсиса, ACE, новая система трансляции in vitro , полученная из культур каллюсов арабидопсиса. Physiol растительных клеток. 52, 1443–1453. DOI: 10.1093 / pcp / pcr080

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ниренберг, М. В., и Маттеи, Дж. Х. (1961). Зависимость внеклеточного синтеза белка в E. coli от природных или синтетических полирибонуклеотидов. Proc. Natl. Акад. Sci . США 47, 1588–1602. DOI: 10.1073 / pnas.47.10.1588

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Новоа, И., Зенг, Х., Хардинг, Х. П. и Рон, Д. (2001). Обратное подавление ответа развернутого белка посредством GADD34-опосредованного дефосфорилирования eIF2alpha. J. Cell Biol . 153, 1011–1022. DOI: 10.1083 / jcb.153.5.1011

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Рихтер К., Бикель Ф., Осбергхаус А. и Хаббух Дж. (2014). Высокопроизводительная характеристика бесклеточной экспрессии насекомых. Eng. Life Sci . 14, 409–417. DOI: 10.1002 / elsc.201300118

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шилдс Д., Блобель Г. (1978). Эффективное расщепление и сегрегация возникающих пресекреторных белков в лизате ретикулоцитов, дополненном микросомальными мембранами. J. Biol. Chem . 253, 3753–3756. DOI: 10.1016 / S0021-9258 (17) 34748-8

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Старр, К. М., и Хановер, Дж. А. (1990). Гликозилирование белка ядерных пор p62. Лизат ретикулоцитов катализирует присоединение O-связанного N-ацетилглюкозамина in vitro . J. Biol. Chem . 265, 6868–6873. DOI: 10.1016 / S0021-9258 (19) 39229-4

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ставнезер Дж. И Хуанг Р. К. (1971). Синтез легкой цепи иммуноглобулина мыши в бесклеточной системе ретикулоцитов кролика. Природа Новый Биол . 230, 172–176. DOI: 10.1038 / newbio230172a0

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Stech, M., Merk, H., Schenk, J. A., Stöcklein, W. F. M., Wüstenhagen, D.A., Micheel, B., et al. (2013). Производство функциональных фрагментов антител в бесклеточной системе трансляции эукариот на основе везикул. Дж. Биотехнология . 164, 220–231. DOI: 10.1016 / j.jbiotec.2012.08.020

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Стеч М., Николаева О., Торинг Л., Штёкляйн В. Ф. М., Вюстенхаген Д. А., Хуст М. и др. (2017). Бесклеточный синтез функциональных антител с использованием сопряженной системы транскрипции-трансляции in vitro на основе лизатов клеток СНО. Sci. Репутация . 7: 12030. DOI: 10.1038 / s41598-017-12364-w

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Стеч М., Кваст Р. Б., Сакс Р., Шульце К., Вюстенхаген Д. А. и Кубик С. (2014). Система бесклеточного синтеза белка с непрерывным обменом на основе экстрактов из культивируемых клеток насекомых. PLoS ONE 9: e96635. DOI: 10.1371 / journal.pone.0096635

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Торинг, Л., Дондапати, С. К., Стеч, М., Вюстенхаген, Д. А., и Кубик, С. (2017). Высокопроизводительное производство «трудноэкспрессируемых» белков в бесклеточной системе с непрерывным обменом на основе лизатов клеток СНО. Sci. Репутация . 7: 11710. DOI: 10.1038 / s41598-017-12188-8

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Торинг, Л., и Кубик, С. (2018). Универсальные системы бесклеточного синтеза белков на основе клеток яичников китайского хомячка. Methods Mol. Биол . 1850, 289–308. DOI: 10.1007 / 978-1-4939-8730-6_19

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Зеенко, В. В., Ван, К., Маджумдер, М., Комар, А. А., Снайдер, М. Д., Меррик, В. К. и др. (2008). Эффективная система трансляции in vitro из клеток млекопитающих, лишенная ингибирования трансляции, вызванного фосфорилированием eIF2. РНК 14, 593–602. DOI: 10.1261 / rna.825008

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Земелла, А., Торинг, Л., Хоффмайстер, К., Шамаликова, М., Эрен П., Вюстенхаген, Д. А. и др. (2018). Бесклеточный синтез белка как новый инструмент для направленной гликоинженерии активного эритропоэтина. Sci. Репутация . 8: 8514. DOI: 10.1038 / s41598-018-26936-x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Zhang, L., Liu, W.-Q., and Li, J. (2020). Создание эукариотической системы бесклеточного синтеза белка pichia pastoris. Фронт. Bioeng. Биотехнология .8: 536. DOI: 10.3389 / fbioe.2020.00536

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Разработка и дизайн учебного контента

Учебные организации ищут решения для контента, которые лучше всего подходят для учащихся, а также для выбранных методов доставки, которые могут справиться с головокружительным набором специализированных курсов для их групп. Курсы, купленные с полки, могут привести к скоплению контента, хранящемуся в разных системах, без постоянного управления и внимания к качеству и актуальности.

Награды

Путь наших экспертов по дизайну и развитию обучения к повышению эффективности и снижению затрат включает:

• Ориентация на решения для обучения, основанные на результатах, и влияние на бизнес
• Гибкие наземные / офшорные общие сервисные центры, обеспечивающие переменный спрос и глобальную масштабируемость
• Гибкие и эффективные процессы разработки, повышающие скорость развертывания и гарантирующие качество
• Снижение затрат достигается за счет:
  • Стандартизированные передовые отраслевые практики и технологии
  • Надзор за поставщиками и агрегирование данных
  • Устранение избыточности в содержании и учебных материалах
  • Эффективное управление проектами и финансовое отслеживание / отчетность

Разработка контента

Центр передового опыта разработки профессиональных услуг Raytheon создает гибкий, настраиваемый и увлекательный учебный контент, который приводит к повышению успеваемости учащихся с помощью различных методов, в том числе:

• Мобильное обучение
• Виртуальный класс
• Класс
• Инструменты поддержки производительности
• Электронное обучение
• Видео, наглядное видео и интерактивное видео
• Коучинг и наставничество
• Дополненная реальность
• Игры и геймификация

Подход RPS к разработке курсов основан на дисциплинированной стратегии для обеспечения оптимальных затрат, графика и качества, предлагая гибкий процесс разработки, который включает анализ, проектирование, разработку, внедрение и оценку (ADDIE), Agile и методы совместной работы.

Мы начинаем с того места, где вы нуждаетесь — с того, что вам нужно — с того, что вам нужно, или с чистого листа. Мы добавляем шестой элемент — обслуживание — для уточнения и развития курсов по мере изменения потребностей и приоритетов — и предлагаем процесс перевода, обеспечивающий представление учащихся с содержанием на их языке.

ЖХМС быстрой разработки

Catapult ^™ , наша быстроразвивающаяся система управления обучающим контентом (LCMS), использует интеллектуальную мобильную лицевую панель с автоформатированием, разработанную и созданную с использованием передовых инструментов для управления одноразовым и часто используемым обучающим решением HTML5.

Благодаря нашей региональной и языковой технологии разработчики поддерживают связь с основным контентом и разрешают адаптировать его к офису, региону и языку, одновременно поддерживая эффективное обновление основного контента во всех вариантах курса. Это сокращает текущее обслуживание курса, поскольку курсы содержатся в одной структуре курса, а не в отдельных курсах.

RPS работает со специалистами по вашему бренду, чтобы создать глобальное руководство по стилю, которое полностью соответствует вашим корпоративным принципам.Наша команда обладает глубокими знаниями в области проектирования систем обучения, а наши медиа-эксперты разрабатывают решения, состоящие из электронных систем поддержки производительности, микрообучения и мобильных приложений.

Подход

RPS выходит за рамки всех типов персонала и применим к любой отрасли:

• Технические услуги: автомобилестроение, тяжелое оборудование
• Профессиональные услуги: операции, управление, финансовые услуги
• Промышленность: производство, энергетика, фармацевтика
• Продажа: товары и услуги
• Правительство: военные, управление воздушным движением

Content Curation

Услуги по курированию контента

RPS помогают организациям любого размера контролировать свой контент, организовывать его для лучшего доступа учащихся и создавать или создавать новый контент для заполнения пробелов.RPS обеспечивает соответствие всего контента целям обучения организации. Вот как.

ОБУЧЕНИЕ АНАЛИЗ И ДИЗАЙН

Проверенные инструменты и методики

RPS позволяют разработать интегрированную индивидуальную дорожную карту и предоставить лучшее решение для обучения.

Первоначально определяя критические области и определяя, какие элементы потока создания ценности для обучения необходимо учитывать, RPS может создать лучшую структуру решения, отвечающую вашим задачам и бизнес-целям.

Анализ потребностей в обучении

Основой успешного плана обучения является анализ потребностей, на котором основано обучение.Этот анализ — как содержание, так и способы обучения — полностью соответствует вашим бизнес-целям. Обучение предназначено для того, чтобы ваши отделы продаж, производства, технического персонала и руководителей были готовы развивать ваш бизнес.

Аналитика данных

Data помогает сосредоточить внимание на конкретных областях производительности, выявляя наиболее частые проблемы, причины и жизнеспособные решения. Эта диагностика стимулирует разработку обучающего решения, начиная с самых критических областей и оказывая наибольшее влияние.Чтобы быть эффективными, решения для обучения анализу эффективности должны поддерживать корпоративную стратегию обучения организации. Понимая, что движет вашим успехом, аналитики RPS оценивают уровни навыков, чтобы выявить пробелы в обучении, которые влияют на производительность, и мы устраняем эти пробелы с помощью правильного обучения.

Анализ учебной программы

Оптимально смешанное решение для обучения значительно повышает удовлетворенность учащихся и снижает общие затраты на обучение. RPS использует запатентованный процесс и набор инструментов, которые гарантируют, что каждая учебная цель согласована с организационной задачей и доставляется эффективным и экономичным методом, последовательно разделенным на уроки, модули и курсы для оптимального сочетания.

Результатом является интегрированный процесс проектирования и разработки, в котором контент создается быстрее, гибко доставляется и профессионально смешивается.

Ссылки по теме

Системы управления обучением (LMS)

Проведение обучения

Учебное управление

Веб-дизайн, разработка и социальные сети

---

Чему я научусь?

Программа JJC Web Design предоставляет студентам основы создания веб-страниц, программирования и управления, участвующих в создании веб-сайтов.Студенты изучают современные языки программирования для создания интерактивных веб-сайтов с динамическим контентом.

Курсы

исследуют последние технологические достижения в области аппаратного и программного обеспечения, включая Adobe Master Suite. Темы включают последние обновления в HTML, CSS, веб-стандартах доступности WCAG, начальной загрузке, jQuery и администрировании облачных серверов.

В чем уникальность веб-дизайна и социальных сетей?

Студенты нашей программы узнают, как создавать исключительный веб-контент и навыки программирования дизайна, которые выделяют их на конкурентном рынке веб-дизайна.Стремительный рост цифрового мира создал потребность и возможности для специалистов по веб-дизайну.

Эта специальность позволяет студентам выбрать концентрацию, которая лучше всего соответствует их желаемым карьерным целям. Те, кто занимается веб-разработкой, изучат самые востребованные языки программирования, такие как C ++, JavaScript, Python, PHP и .Net. Те, кто интересуется социальными сетями, сосредоточатся на передовых методах использования в бизнесе, оптимизации SEO, взаимодействии человека с компьютером (HCI) и веб-разработке на таких платформах, как Drupal, WordPress и новейшие платформы CMS.

Студенты других специальностей также могут пройти курсы в этой области, чтобы стать внештатными создателями веб-сайтов.

Какую степень / сертификат я получу?

Степень

Сертификаты

Каковы мои карьерные возможности?

По данным Бюро статистики труда, с 2019 по 2029 год занятость веб-разработчиков и цифровых дизайнеров вырастет на 8 процентов, что намного быстрее, чем в среднем по всем профессиям.